[发明专利]亨廷顿蛋白的酰基化修饰方法有效
申请号: | 201310555256.4 | 申请日: | 2013-11-11 |
公开(公告)号: | CN103601798A | 公开(公告)日: | 2014-02-26 |
发明(设计)人: | 王喆明 | 申请(专利权)人: | 杭州璞题生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/47 | 分类号: | C07K14/47;C07K1/107;C12N15/70 |
代理公司: | 杭州华知专利事务所 33235 | 代理人: | 宁冈 |
地址: | 311121 浙江省杭州市余杭*** | 国省代码: | 浙江;33 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 亨廷顿 蛋白 酰基化 修饰 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种蛋白质的化学修饰,具体涉及一种亨廷顿蛋白的酰基化修饰方法。
背景技术
蛋白质修饰是一个复杂的过程,在真核生物中修饰类型很多,常见的有糖基化、乙酰化、泛素化、磷酸化和SUMO化,蛋白质修饰能够改变蛋白质的活性、定位或功能。蛋白质中的乙酰化修饰能够调控蛋白的多种性质,包括DNA-蛋白质相互作用、亚细胞定位、转录活性和蛋白质稳定性等。乙酰化的蛋白质具有能够高抵抗氨基肽酶和泛素依赖蛋白酶降解的能力。研究表明,在扩大的多谷氨酰胺诱导疾病中,蛋白的乙酰化和去乙酰化的失衡是一个关键过程。
亨廷顿舞蹈病(Huntington disease,HD)是一种常染色体显性遗传的神经变性疾病,HD基因编码一个由3144个氨基酸组成的亨廷顿蛋白(Huntingtin,Htt),从Htt氨基酸末端第17位开始有一段重复的谷氨酰胺(CAG)序列。随着多聚谷氨酰胺的过度延长,Htt蛋白会在转谷氨酰胺酶的作用下发生交联而形成聚集体,在主链和侧链酰胺基之间氢键连接的作用下,多聚谷氨酰胺序列可形成多聚物,称为多聚谷氨酰胺序列(PolyQ)。正常人的PolyQ长度小于35个,而HD患者的PolyQ长度会超过37个。这些异常蛋白质积聚成块,损坏部分脑细胞,特别是那些与肌肉控制有关的细胞,导致患者神经系统逐渐退化,神经冲动弥散,动作失调,出现不可控制的颤搐,并能发展成痴呆,甚至死亡。临床表现主要为舞蹈样不自主动作、精神障碍和进行性痴呆。
赖氨酸的乙酰化是一种可逆的蛋白质后修饰,并且在基因表达中有重要的调控作用,尤其是组蛋白的乙酰化对机体影响更大。乙酰化主要有三种形式,N-乙酰化、C-端的酰胺化和多肽侧链酰基化,酰基化多肽改变了多肽的电荷分布,对多肽和蛋白的周期、生物活性和稳定性有重要影响,同时乙酰化与对泛素化、磷酸化有竞争性作用。由于亨廷顿蛋白易于凝聚等,基于亨廷顿蛋白的发病机制,研究其乙酰化对亨廷顿疾病有指导性意义。
没有修饰的亨廷顿蛋白显示出比较容易凝聚等,目前国内还没有研究所或者机构对亨廷顿蛋白进行化学修饰,通过对亨廷顿蛋白的酰基化化学修饰,乙酰化处理后的蛋白水解程度较小,而非乙酰化蛋白水解程度较大,即说明了乙酰化修饰后的亨廷顿蛋白稳定性较强。
发明内容
针对现有技术中存在的不足,本发明的目的是提供一种亨廷顿蛋白的酰基化修饰方法,经过乙酰化处理后的蛋白质,出峰时间延长,同时吸收峰强度有一定的变化,水解酶处理24h后,经过乙酰化处理后的蛋白水解程度较小,而非乙酰化蛋白水解程度较大,处理48h后,经过乙酰化处理后的蛋白与24h相比只有少量蛋白水解,而非乙酰化水解程度较大,有多个片段产生,即说明了乙酰化修饰后的亨廷顿蛋白稳定性较强。
本发明的目的可通过下列技术方案来实现:一种亨廷顿蛋白的酰基化修饰方法,包括以下步骤:(1)、获取重组蛋白Htt(1-90):a、亨廷顿蛋白基因的获得;b、重组表达质粒pTWIN1-htt的构建;c、表达亨廷顿蛋白的重组大肠杆菌菌株DH5α-htt的构建;d、重组蛋白的表达;(2)、重组蛋白Htt(1-90)的纯化;(3)、SPPS方法获得酰基化修饰的Htt(Cys-K92-K158)多肽;(4)Htt(Cys-K92-K158)多肽的纯化;(5)Htt(Cys-K92-K158)多肽与重组蛋白Htt(1-90)经过偶联获得经酰基化修饰目的蛋白Htt(1-158);(6)经酰基化修饰目的蛋白Htt(1-158)的纯化。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于杭州璞题生物科技有限公司,未经杭州璞题生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310555256.4/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:一种新型静脉注射兑药瓶
- 下一篇:带近红外装置的燃艾助吹灸机