[发明专利]叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料及其检测肿瘤细胞

权利要求书

1.一种叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料，由以下方法制备而成：1）配制氧化石墨烯水溶液0.5 mg/mL，加入聚烯丙基胺盐酸盐和氢氧化钾，混匀后置于70℃水浴加热24小时，将溶液收集再离心洗涤，去除多余的聚烯丙基胺盐酸盐和氢氧化钾；2）使用1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为交联剂，叶酸上的羧基与聚烯丙基胺盐酸盐修饰氧化石墨烯上的氨基通过酰胺化交联，在室温下反应24小时后，将溶液收集再离心洗涤，去除多余的交联剂和叶酸，得到的叶酸功能化氧化石墨烯水溶液；3）将所得到的叶酸功能化氧化石墨烯水溶液与7.9 mmol/L的氯铂酸水溶液以体积比为10:1混合均匀，80℃水浴加热24小时，得到的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯水溶液呈黑色，4 ℃保存。

2.根据权利要求1所述的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料，其特征是所使用的基底氧化石墨烯的制备方法为：称取325目鳞片石墨1.2 g，加入到144 mL浓度为18 mol/L的浓硫酸和16 mL浓度为15 mol/L的磷酸的混合溶液中；充分搅拌后，置于在0℃冰浴中；将7.2 g高锰酸钾以少量多次方式缓慢加入到以上混合溶液中；保持0℃冰浴，磁力搅拌3小时后，将所得墨绿混悬液转移至50℃温水浴中，控温12小时，得到的紫黑色混悬液缓慢加入到160 mL冰水混合物中，剧烈搅拌1小时；继而往溶液中逐滴滴加4 mL质量浓度为30%的过氧化氢溶液，溶液颜色突变为亮黄色，所得溶液经孔径为20-30微米的G1砂芯漏斗过滤，继而4000转每分钟离心30分钟，弃去上清液；加入80 mL 双蒸水充分振荡洗涤，4000转每分钟离心30分钟，弃去上清液，沉淀颜色呈土黄色；再加入80 mL质量浓度为30%的盐酸充分振荡洗涤，经为孔径20-30微米的G1砂芯漏斗过滤去除不溶颗粒，滤液4000转每分钟离心30分钟，弃去上清液，沉淀颜色继续加深；接着多次用无水乙醇将沉淀物洗至pH值为中性，4000转每分钟离心30分钟，弃去上清液，沉淀呈棕黄色；最后用乙醚冲洗沉淀，经孔径为1.5-2.5微米的G5砂芯漏斗过滤，获得滤饼，滤饼在室温下过夜晾干，得到棕色的氧化石墨；取50 mg棕色的氧化石墨溶解于100 mL双蒸水，常温下超声3小时，充分剥离后得到0.5 mg/mL透明澄清的棕黄色氧化石墨烯水溶液。

3.权利要求1或2所述的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料模拟过氧化物酶，催化过氧化氢氧化3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，并识别细胞膜表面叶酸受体。

4.根据权利要求3所述的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是在3.290 mLpH为5、浓度为20 mmol/L的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液中依次加入0.5 mL浓度为4 mol/L的过氧化氢、0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐，再加入10 μL浓度为0.67 mg/mL的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料水溶液，混合后30 ℃温浴10分钟，溶液由无色变为蓝色，在652 nm处有吸收峰，加硫酸终止反应，溶液变为黄色，在450nm处有吸收峰。

5.根据权利要求3所述的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料与MCF-7（人乳腺癌细胞）、SGC-7901（人胃癌细胞）细胞膜上过度表达的叶酸受体特异性识别并结合形成结合体，而不与低表达叶酸受体的正常细胞HUVEC（人脐带静脉内皮细胞）结合，所述结合体通过催化过氧化氢氧化3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐生成蓝色产物，该产物在652 nm处有最大吸收峰，区别肿瘤细胞和正常细胞。

6.根据权利要求3所述的叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料模拟过氧化物酶，其特征是叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料与经过叶酸饱和的MCF-7（人乳腺癌细胞）极少量结合，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐无明显颜色变化。