[发明专利]甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法

说明书

一、技术领域

本发明属于植物生物技术育种领域，涉及一份甜瓜蔓枯病聚合抗源新种质及其选育的方法，可用于甜瓜抗蔓枯病新品种的选育及聚合抗源材料的筛选。

二、技术背景

甜瓜蔓枯病是严重危害甜瓜生产的全球性病害之一，发生后常会导致毁灭性的后果，而防治该病害最安全、有效且节约成本的方法是培育抗蔓枯病品种。国际上常用的抗蔓枯病材料为PI140471、PI157082、PI511890、PI482398和PI482399(其抗性基因分别命名为Gsb-1、Gsb-2、Gsb-3、Gsb-4和gsb-5)，PI420145则是本课题组新筛选的1份甜瓜抗蔓枯病材料(Wolukan，2007)，而相关研究表明，除gsb-5为隐性单基因外，其他相关抗性基因均为显性单基因。蔓枯病菌会受环境影响而发生变化，若品种仅携带单个抗蔓枯病基因，则会因病原菌产生新的生理小种或转化型而导致其抗性降低甚至失去抗性，若含有多个抗病基因，则能克服这一不足，提供更加持久稳定的抗性。所以，如果几份抗蔓枯病基因是不同的，则可以考虑将不同抗蔓枯病材料中的抗蔓枯病基因聚合到一份材料中。2011年，本课题组刘文睿经等位性测验证明，PI420145所含抗病基因与Gsb-1、Gsb-2、Gsb-3及Gsb-4基因均为非等位基因，这为甜瓜抗蔓枯病聚合育种的可行性提供了理论依据(刘文睿，2011)。

传统选育抗病材料的方法是根据接种后植株的表型，筛选不发病或者发病轻的植株作为抗病材料。但是，受接种技术和发病条件的影响，选择效率和准确度不高。利用分子标记进行辅助筛选，则可在早代进行选择，缩小育种群体，并且不受环境、生长季节的限制，大大缩短育种年限、提高育种效率。CMTA170a是本课题组申请的专利《甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-4的SSR标记》(申请号2011100810734)中筛选到的与PI482398的抗性基因Gsb-4连锁的SSR分子标记，可用于相关抗性基因的筛选；EcoRI-TG/MseI-CTC200是本课题组申请的专利《甜瓜抗蔓枯病基因位点的分子标记方法》(申请号200710025531.6)中的与PI420145抗蔓枯病基因连锁的AFLP标记，可用于含PI420145抗蔓枯病基因的检测。然而，到目前为止仍未见有甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料的报道，这在一定程度上限制了甜瓜抗蔓枯病聚合育种研究。

三、发明内容

技术问题

本发明涉及一份甜瓜蔓枯病聚合基因材料及其选育方法，主要针对单一抗源抗性基因抗性不稳定及AFLP标记辅助选择技术要求高，费用昂贵等问题，采用传统的接种鉴定法结合分子标记辅助选择，筛选得到一份甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料，为进一步发掘出新的稳定的甜瓜抗蔓枯病基因资源提供基础，进而大大提高选择效率，减少成本消耗，加快培育优良抗蔓枯病甜瓜品系。

技术方案

本发明甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法，其实施方案如下：

1.甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法，包括：

以甜瓜抗蔓枯病材料PI420145和PI482398为亲本进行杂交，并连续自交，利用表型鉴定和分子标记辅助选择筛选技术获得较为稳定的甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料4598；

2.上述的甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法，其特征在于：

1)PI482398要比PI420145提早15天进行催芽，定植，以使两者花期相遇；

2)以PI420145(雌花为两性花)作为母本，PI482398为父本，于开花前一天套袋隔离，并对PI420145雌花去雄，4朵雄花授一朵雌花，授粉后32-36天，采收发育成熟果实的种子；

3)杂交种子种植后，经表型鉴定和分子标记鉴定，筛选同时具有PI482398和PI420145的抗病基因且表现为高抗的植株进行自交留种，并对自交种进一步筛选鉴定，直至获得较为稳定的聚合材料。

3.上述的甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料及其选育方法，其特征在于分子标记鉴定过程是同时利用与PI420145和PI482398抗蔓枯病基因分别连锁的分子标记进行选择，其中将与PI420145连锁的AFLP标记转化成简单易行的SCAR标记SGSB₁₈₀₀，其序列为：

正向引物：5’-AGACGAAGGACGGTTAGCTTT-3’，

反向引物：5’-TTAAATCCCAAAGACATGGCG-3’。

4.上述方法育成的甜瓜抗蔓枯病聚合基因材料在甜瓜抗蔓枯病育种中的应用。

有益效果