[发明专利]一种具有自生固氮、解磷解钾能力的醋酸钙不动杆菌及其应用

权利要求书

1.一种具有自生固氮能力醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）X.L.Zhu.SGD07-3-16，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5455。

2.根据权利要求1所述的具有自生固氮能力的醋酸钙不动杆菌，其特征在于该菌株具有以下特性：G⁺，好氧或兼性厌氧，呈粗短杆或近似球状，在固体培养基A上菌落呈黄色圆形凸起，边缘整齐，菌落周围有透明圈，在无氮固体培养基B上菌落较小，透明圈大而明显；其最适的生长温度28~32℃，最适的pH值为6.0~8.0；其固氮酶活性为39.62~49.73nmol·mg^-1·h^-1，解无机磷能力为282.2mg/l，解钾能力为32.4 mg/l；产吲哚乙酸的能力为27.28.25~36.72μg/ml，ACC脱氨酶活性为0.472~0.650μmol α-KA·（mg Pr·h）^-1；

所述固体培养基A组成为：酵母粉5-10g，NaCl 2-5g，蛋白胨5-10g，FeSO₄ ·7H₂O 0.005-0.01g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025-0.005 g，琼脂粉15-20g，蒸馏水1000ml，pH 7.0~7.2；

所述的无氮固体培养基B组分为：葡萄糖 10-20g，KH₂PO₄ 0.2g，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.2g，NaCl 0.15-0.25g， CaSO₄·2H₂O 0.15-0.25g，CaCO₃ 5-8 g，琼脂 15-18g，蒸馏水1000ml，pH 7.0~7.2。

3.含有权利要求1所述土壤杆菌的微生物菌剂。

4.权利要求3所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1)菌种发酵

①将冻存的SGD07-3-16在37℃条件下快速解冻，按照0.5-1%的接种量接入装有10-15ml液体培养基A的试管中，28-30℃，静置培养15-20小时，得到SGD07-3-16的一级种子液；

所述的液体培养基A组成为：酵母粉5-10g， NaCl 2-5g，蛋白胨5-10g，FeSO₄ ·7H₂O 0.005-0.01g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025-0.005 g，蒸馏水1000ml，pH 7.0~7.2；

②二级三角瓶液体培养

将一级种子液按照3-5%的接种量接入装有50-100ml 发酵培养基C 的三角瓶中，28-30℃，120-150rpm，培养15-20小时，得到SGD07-3-16的二级种子液；

所述的培养基C组成为：蔗糖5-10g，淀粉2-3g，豆粕20-30g，KH₂PO₄ 0.2-0.41 g, K₂HPO₄ 0.3-0.52 g, CaCl₂ 0.1-0.2 g, MgSO₄·7H₂O 0.1-0.2 g ，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0025-0.005 g，水1000ml，pH 7.0~7.2；

③三级发酵罐发酵

发酵罐体积10L，加入发酵培养基C 7.0L，灭菌并冷却后，将二级培养液按照5-10%的接种量接入发酵罐中，进行发酵培养，罐温28-30℃，搅拌转速为250-280rpm，通风比1:（0.4-0.6），培养48-50 小时，所得即为SGD07-3-16菌悬液； 

2）将秸秆粉、草炭土、稻糠用高速粉碎机粉碎，过60目筛，按照质量百分比为50-70:20-30:10-20的比例混合，再加入30-50%的发酵培养基C，再加入一定浓度的钼酸钠和硫酸亚铁，使其中钼酸钠含量为0.2~0.5g/Kg，硫酸亚铁含量为0.05~0.08g/Kg，混合均匀后，用布袋或耐高温塑料袋装，1-1.5Kg/袋，0.1MPa高压灭菌2-3小时，取出冷却备用；

3）将步骤1）中得到的SGD07-3-16菌悬液打入储液罐即得固氮液体菌剂，将发酵液按照100-200ml/kg的剂量与步骤2）中所得的固态基质混匀，28-30℃吸附发酵5-7天，达到每克菌剂中活菌数不低于10⁹CFU，包装后即得到固体固氮菌剂产品。

5.权利要求1所述醋酸钙不动杆菌在制备生物固氮菌肥中的应用。