[发明专利]基于巨大芽孢杆菌的谷氨酰胺合成酶外源表达方法

权利要求书

1.一种谷氨酰胺合成酶基因序列，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种基于巨大芽孢杆菌的谷氨酰胺合成酶外源表达方法，其特征在于，将测序得到的谷氨酰胺合成酶基因序列通过引物序列扩增并连接到表达载体中得到重组表达载体，并进一步将重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选到含有目的基因的转基因重组菌。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的测序是指：以巨大芽孢杆菌NCT-2的基因组DNA为模板进行PCR扩增，然后将扩增产物进行电泳检测；并将扩增产物切胶回收后连接到pET-41a载体上进行测序。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的PCR扩增采用的引物由：

正向引物Gln A-F:5'-ATGGCAAAGTACACAAAAGAAGATA-3'，以及

反向引物Gln A-R:5'-TTAATATTGGCTCATGTATTGGTCAC-3'所组成。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的引物序列扩增采用的引物为PCR扩增采用的引物的5'端分别设计了EcoR I和Stu I酶切位点用于连接到表达载体，即：

正向引物Nas E-Eco R I-F:

5'-CGGAATTCATGGTGAATAAAAACATTACAAAAG-3'以及

反向引物Nas E-Stu I-R:

5'-AAGGCCTTTATTCCTCAATTAAAAGATACAGCA-3'组成。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的表达载体为pET-41a质粒；所述的大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)；所述的巨大芽孢杆菌NCT-2(Bacilus megaterium)保藏编号为CGMCC No.4698。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的重组表达载体是指：重组表达质粒pET-41a-Bm-Nas A。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的转基因重组菌是指：含有重组表达质粒pET-41a-Bm-Nas A的大肠杆菌BL21(DE3)。

9.一种根据权利要求2-8中任一所述的转基因重组菌的应用，其特征在于，将其发酵后量产谷氨酰胺合成酶。

10.一种根据权利要求1-8中任一所述的谷氨酰胺合成酶基因序列的应用，其特征在于，将其用于表达目的蛋白产物。