[发明专利]一种用于防治苹果树腐烂病的糖丝菌及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物农药技术领域，具体涉及一种糖丝菌、其微生物制剂以及将其应用于防治苹果树腐烂病的病害。

背景技术

由于化学农药的长期使用，使植物病害存在对杀菌剂的适应性变异，在某些杀菌剂的长期选择压力下，可以产生明显的抗药性，从而导致化学防治的失败。生产中应综合地考虑不同杀菌剂的应用策略，以充分发挥各种杀菌剂的作用，尽量避免抗药性的产生。放线菌是一种常见的拮抗微生物，有助于开发和利用这类微生物资源。放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。内生放线菌指存在于健康植物体内,产生系列活性物质并能与宿主植物共同生活的放线菌。它们的代谢活动及产物可促进宿主植物适应外界各种(生物、非生物)环境压力,维持生态系平衡。

苹果是我国的重要经济作物和出口水果，栽培面积和产量均居世界首位。然而，病害却严重制约着我国苹果产业的发展，特别是苹果树腐烂病在我国分布广、危害重、防治难，果农将其称之为苹果树“癌症”。

目前苹果树腐烂病的防治方法主要有物理防治和化学防治。化学农药的大量使用造成严重的环境污染，农产品的农药残留，病菌抗药性、耐药性。这些问题已对人们的生活产生了严重影响，而生物防治可以最大限度地减少化学农药的用量，以改善生态环境。农用抗生素作为生物农药中的重要类群，较其它生物农药具有更高效、快速、安全等优点，且均在农作物病虫害防治工作中发挥着重要作用。

但是，目前我国生物农药的市场占有率仅有2％～3％，其潜力远没有得到充分的开发和应用。目前国内尚无利用拮抗菌防治苹果树腐烂病的生防制剂。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的旨在于探寻生物农药的新来源，利用内生微生物资源而开发一种可以用于苹果树腐烂病害防治的高效、可产业化生产的生防菌菌株。本发明提供了一种杨凌糖丝菌（Saccharothrix yanglingensis）Hhs.015菌株以及该菌株的筛选、鉴定方法；进一步地，提供该菌株发酵工艺及抗菌活性物质制备工艺，以及提供该菌株抗菌活性物质防治苹果树腐烂病的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明所述的杨凌糖丝菌（Saccharothrix yanglingensis）Hhs.015菌株分离自温室大棚内黄瓜根部组织中，经形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分分析和16S rDNA同源性序列分析，确定该菌株为杨凌糖丝菌（Saccharothrix yanglingensis）Hhs.015。具有以下特征：

1、菌株在高氏一号培养基上基内菌丝杏黄色，气生菌丝浅粉色，不产生可溶性色素；

2、基生菌丝细长，舒展，发达；多分枝，无隔。气生菌丝细密柔曲，顶部螺旋状，生长不旺盛，易断裂。培养后期，气生菌丝成熟，分化成孢子链，少螺旋，松散；

3、生理生化反应表现为：不能使牛奶凝固，也不能胨化，可使石蕊牛奶变红；可水解淀粉；产卵磷脂酶；不产生硫化氢；产生黑色素；不能使明胶水解；产生纤维素酶；能还原硝酸盐。生长温度15～37℃，最适生长温度为28℃；能利用糊精、葡萄糖、蔗糖、D-果糖、半乳糖、麦芽糖、甘油、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、肌醇、木糖、山梨醇；不能利用甘露糖、马尿酸钠、棉子糖。能以甘氨酸、丙氨酸、色氨酸为氮源；不能利用赖氨酸、L-半胱氨酸、胱氨酸、瓜氨酸、尿素、D,L-酪氨酸、天门冬氨酸；

4、16S rDNA序列分析结果在GeneBank中进行最大同源性比较，发现16S rDNA测序结果与糖丝菌属16s rDNA序列同源性最大达到99%。

本发明所述的杨凌糖丝菌（Saccharothrix yanglingensis）Hhs.015已于2009年04月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.3023。保藏期限30年，30年内免费提供活菌。

本发明所制备的微生物制剂含有保藏编号为CGMCC No.3023的杨凌糖丝菌（Saccharothrix yanglingensis）Hhs.015的代谢产物。

制备具有保藏编号为CGMCC No.3023的杨凌糖丝菌（Saccharothrix yanglingensis）Hhs.015的微生物制剂方法如下：