[发明专利]一种以Cfr蛋白为免疫原得到的单克隆抗体及其在检测Cfr蛋白中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种以Cfr蛋白为免疫原得到的单克隆抗体及其在检测Cfr蛋白中的应用。

背景技术

cfr基因首次由Stefan Schwarz教授在2000年从呼吸道感染的小牛鼻腔拭子中分离的松鼠葡萄球菌中发现。敏感性实验表明该菌对四环素、红霉素、卡那霉素、氯霉素和氟苯尼考均具有耐药性。通过质粒抽提、质粒转化实验和抗生素敏感性测定发现一个介导多药耐药的质粒pSCFS1。该质粒大小为17.1-kb，除了包含介导红霉素耐药的ermC基因外，还发现了一个能够介导对氯霉素（64μg/mL）和氟苯尼考（32μg/mL）的耐药性的蛋白质，即为Cfr蛋白（由349个氨基酸残基组成）。cfr即Chloramphenicol-florfenicol resistance的缩写。

进一步的研究表明，cfr基因编码的Cfr蛋白为一种rRNA甲基转移酶，它不同于其它已知类型的rRNA甲基转移酶，但是和自由基SAM超家族中作用于蛋白自由基形成、异构化和异常甲基化等功能的酶类相似。Cfr蛋白的作用位点是多种药物作用的靶位点A2503。由于葡萄球菌23S rRNA中氯霉素类药物结合位点和林可霉素药物结合位点部分重叠，而且A2503位的甲基化使23S rRNA中上述两类药物的结合位点构型发生变化，因而导致了葡萄球菌对氯霉素类和林可霉素的耐药。截断侧耳素、恶唑烷酮类和链阳菌素A类药物作用于革兰氏阳性菌中23S rRNA转肽中心，该转肽中心和A2503位临近，因此A2503位的甲基化还可以介导这三类药物的耐药。深入进行对A2503位的甲基化介导的耐药机制研究后发现，Cfr蛋白催化该腺苷第8位的甲基化后而导致了细菌对酰胺醇类、林可胺类、恶唑烷酮类、截断侧耳类和链阳菌素A类以及部分十六元环大环内酯类药物的耐药性。

上述各类药物中既包含动物专用抗菌药物（氟苯尼考、泰妙菌素、沃尼妙林），也有人临床专用的抗菌药物（喹奴普汀/达福普汀），甚至还包括2000年获得美国FDA批准的人工合成的恶唑烷酮类抗生素-利奈唑胺，该药被认为是临床上治疗耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐万古霉素的肠球菌（VRE）最后一道防线的药物。

因此cfr基因介导病原菌的耐药性是近年来耐药性领域的研究热点之一，具有很重要的公共卫生意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种以Cfr蛋白为免疫原得到的单克隆抗体及其在检测Cfr蛋白中的应用。

本发明提供了Cfr蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株Cfr-D9（简称杂交瘤细胞Cfr-D9），该杂交瘤细胞已于2013年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏号为CGMCC No.8415。

本发明还保护所述杂交瘤细胞Cfr-D9分泌的单克隆抗体。

本发明还保护所述杂交瘤细胞Cfr-D9或所述单克隆抗体在制备与Cfr蛋白结合的试剂盒中的应用。

本发明还保护所述杂交瘤细胞Cfr-D9或所述单克隆抗体在制备辅助检测Cfr蛋白的试剂盒中的应用。

本发明还保护所述杂交瘤细胞Cfr-D9或所述单克隆抗体在辅助检测Cfr蛋白中的应用。

本发明还保护所述杂交瘤细胞Cfr-D9或所述单克隆抗体在制备辅助检测含有Cfr蛋白的编码基因的菌的试剂盒中的应用。

本发明还保护所述杂交瘤细胞Cfr-D9或所述单克隆抗体在辅助检测含有Cfr蛋白的编码基因的菌中的应用。

以上任一所述的Cfr蛋白具体可如序列表的序列1所示。

本发明提供的杂交瘤细胞可以分泌得到相应的单克隆抗体。本发明提供的单克隆抗体可以结合并识别Cfr蛋白，具有良好的特异性和较高的效价。由于Cfr蛋白介导病原菌的对多种药物的耐药性，本发明具有良好的推广价值。

附图说明

图1为Western Blot的结果图谱。

具体实施方式