[发明专利]一种高产雷帕霉素发酵工艺

权利要求书

1.一种高产雷帕霉素发酵工艺，采用吸水链霉菌发酵法制取雷帕霉素，其特征在于：所用方法分为以下几个步骤：

①将菌种转接种于斜面培养基上，于28℃的生化培养箱中培养10～15天，待斜面完全被孢子覆盖，孢子颜色由白转浅灰色后，即刻使用或贮存于4℃的环境下；

②用接种铲从己培养好的雷帕霉素产生菌斜面上取一环(或按0.5%孢子悬液量)接种至装有30m/250ml种子培养基的锥形瓶中，摇床转速为200r/m，温度为30℃，培养52～60h；

③按1%～3%接种量将种子培养液接种至装有200L/400L种子培养液的一级种子罐中，转速100r/min，培养48h，培养温度28～30℃ ，风量2.0～2.2m³/h，罐压0.02MPa；

④按2%～10%接种量将种子培养液接种至装有1500L/2200L种子培养液的二级种子罐中，转速80～100r/m，培养温度28～30℃，培养48h ，风量2.0～2.2m³/h罐压0.02MPa；

⑤将二级种子罐种子罐种子培养液按照5～10%的接种量接入15000L发酵罐中，发酵罐的容积系数为75%，培养温度25～27℃，维持罐压0.05～0.07MPa，风量35～46m³/h，转速80r/m～200r/m，适当调整风量和转数保证溶氧不低于20%，在发酵前期维持pH值6.0～7.5，在合成期维持pH值4.5～6.0，培养时间为192～216h。

2.如权利要求1所述的一种高产雷帕霉素发酵工艺，其特征在于：斜面种子培养基包括以下组份及含量：黄豆粉0.5~1.5g/L、可溶性淀粉8~12g/L、K₂HPO₄ 0.2~0.8g/L、MgSO_4·7H₂O 0.5~1.5g/L、琼脂19~21g/L。

3.如权利要求1所述的一种高产雷帕霉素发酵工艺，其特征在于：所述的种子培养基包括以下组份及含量:蛋白胨10～15g/L、酵母膏 6～10g/L、葡萄糖 20～25g/L、L-赖氨酸 5～10g/L，NaH₂PO₄ 0.5～1.0g/L，pH 灭菌前调至6.5～7.0，121℃灭菌45min。

4.如权利要求1所述的一种高产雷帕霉素发酵工艺，其特征在于：发酵培养基包括以下组份及含量:酶解棉籽粉14.8～17.8g/L、糊精5～10g/L、甘油60 ～80g/L、玉米粉 4.5～6.0g/L 、L-赖氨酸2～4 g/L、KH₂PO₄0.75～1.0 g/L、K₂HPO₄0.75～1.0g/L、泡敌1.6~2.1g/L、微量元素液 1.2~1.8ml/L、加水补足1L。

5.如权利要求1所述的一种高产雷帕霉素发酵工艺，其特征在于：所述的优选微量元素溶液中包含CoCl₂·7H₂O 2.0～3.0g/L，优选微量元素组合为MgSO₄ 120～130g/L、ZnSO₄·7H₂O 40～60g/L、FeSO₄·7H₂O 10～30g/L、CoCl₂·7H₂O 2.0～3.0g/L、CuSO₄·5H₂O 4.0～5.0g/L、浓盐酸20～30ml/L、加水补足1L。

6.如权利要求1所述的一种高产雷帕霉素发酵工艺，其特征在于：所述优化的发酵工艺中，采用L-哌可酸、莽草酸、甘油联合补料，其中在发酵培养24h后开始补加含48~52g/L甘油和0.7~0.8g/L磷酸盐缓冲液的混合料液，pH值为6.5～7.0，每次200～500ml，每隔30min补加一次；在发酵培养60h开始补加50g/L甘油的混合水溶液，每次500～1000ml，每隔30min补加一次；在发酵60h加入含0.3~1.7g/L L-哌可酸、1.8~2.2g/L莽草酸混合水溶液100ml，每24h补加一次；在发酵培养72h再补加微量元素液0.45~0.55ml/L。