[发明专利]一种重组Taq DNA聚合酶及其制备方法有效
| 申请号： | 201310576003.5 | 申请日： | 2013-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN103602643A | 公开（公告）日： | 2014-02-26 |
| 发明（设计）人： | 刘涛;马秀芬 | 申请（专利权）人： | 青岛思能基因生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266003 山东省青岛市市南区红岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 taq dna 聚合 及其 制备 方法 | ||
1.一种重组Taq DNA聚合酶，其特征在于，其蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.一种编码权利要求1所述的重组Taq DNA聚合酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.一种制备权利要求1所述的重组Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）克隆SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；
（2）将步骤（1）所得的核苷酸片段和质粒pET32a进行连接，构建重组质粒pET32a-Taq；
（3）将重组质粒pET32a-Taq转化入大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21中，获得表达菌株；
（4）表达菌株利用LB 培养液进行悬浮培养，37℃ 培养4.5 小时后，加入终浓度为0.5 mM 的IPTG 诱导16-20小时后；解离菌体，过滤；获得所述重组Taq DNA聚合酶。
4.根据权利要求3所述的制备重组Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述解离菌体为采用溶菌酶解离菌体。
5.根据权利要求3所述的制备重组Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述过滤为以层析柱和透析袋连续过滤。
6.根据权利要求4所述的制备重组Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述溶菌酶的浓度为4mg/ml。
7.根据权利要求5所述的制备重组Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述层析柱为Bio-Rex 70 的离子交换柱树脂。
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