[发明专利]一种呋喃妥因化学发光检测试剂盒

说明书

技术领域

    本发明涉及一种试剂盒，具体的说是一种呋喃妥因化学发光检测试剂盒。

背景技术

目前检测饲料中抗生素的技术主要有以下几种方法：

（1）理化检测法

    20世纪90年代以后，绝大多数测定呋喃妥因的理化检测法主要依靠液相色谱技术进行分离，其次是色／质谱联用技术，气相色谱法、高效薄层色谱法等检测法，因其各自特有的性能，在抗生素残留检测方面稍有应用。色谱法检测饲料中的药物残留要经过样品处理(包括样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤)、药物的分离和药物的检测。理化检测法利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，能进行定性、定量分析和药物鉴定，可作为饲料抗生素检测的确证方法。该法检测敏感性较高，但仪器及检测费用高、检测程序复杂、较耗时间等。

（2）免疫学分析法

  免疫学分析法是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析方法，目前药物残留免疫分析技术主要分三大类：相对独立的分析方法、免疫分析技术与常规理化分析技术联用的方法、免疫受体法。1973年荷兰van weeman、schurrs及瑞典Engvall、Perlmann分别提出酶联免疫吸附法，30多年来国内外学者对免疫学方法检测食品中抗生素进行了大量研究。但由于抗生素是半抗原，抗原构建技术难度大、免疫特异性强、检测成本高，目前IDEXX等公司在免分析法方面的研究较为成熟，国内该技术仍处于研究发展中。当前主要是用酶联免疫吸附试验、放射性免疫发光法、荧光免疫法、化学发光法等；酶联免疫吸附试验、放射性免疫发光法、荧光免疫法等方法与发光相化学发光法比较，其酶免灵敏度较低。

发明内容

本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种呋喃妥因化学发光检测试剂盒，其具有灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速等优点。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种呋喃妥因化学发光检测试剂盒，包括浓缩洗液、阴性对照品、阳性对照品、化学发光液、呋喃妥因标准品、辣根过氧化物酶标记的呋喃妥因特异性抗体和已包被呋喃妥因的发光板；

所述的浓缩洗液为：含有Tween-20和氯化钠的磷酸盐缓冲液；

所述的阴性对照品为：5份以上单独存放的除菌过滤后的呋喃妥因检测为阴性的猪尿混合物；

所述的阳性对照品为：5份以上单独存放的除菌过滤后的呋喃妥因检测为阳性的猪尿混合物；

所述的化学发光液，包括A液和B液；A液配制方法为：首先配置0.2 mol/L pH7.8的Tris-HCl缓冲液，在此缓冲液中加入鲁米诺和四苯硼钠，混合均匀即可得到A液；B液配制方法为：首先配置0.2 mol/L pH7.8的Tris-HCl缓冲液，在此缓冲液中按重量比加入0.1% H₂O₂混合均匀即可得到B液；

所述的呋喃妥因标准品为浓度分别为0ng/ml、0.1ng/ml、0.3 ng/ml、0.9 ng/ml、2.7 ng/ml、8.1ng/ml呋喃妥因的稀释液；

所述的辣根过氧化物酶标记的呋喃妥因特异性抗体为， 辣根过氧化物酶标记的以呋喃妥因-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔所得抗呋喃妥因多克隆抗体；用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的呋喃妥因特异性抗体，反应体系为：先用1ml浓度5mg/ml的辣根过氧化物酶溶液与0.15ml浓度0.1 mol/L 的NaIO₄溶液混匀后，置于4℃避光0.5小时，然后加入0.25ml的乙二醇摇匀室温避光1小时，然后置于4℃透析过夜，之后用0.2ml 浓度0.2 mol/L，pH值为9.6 的碳酸盐包被溶液将透析后得到的醛化辣根过氧化物酶溶液调pH值为9.2-9.5，将5mg抗呋喃妥因多克隆抗体溶于1.0ml浓度0.01 mol/L，pH9.6的包被液后立即加入上述醛化后的辣根过氧化物酶溶液中于37℃反应1小时，然后加入0.1ml浓度 3.5mg/ml的NaBH₄溶液，混匀于4℃放置2小时，用凝胶过滤层析进行纯化后，选择效价≥1：1000的无色或带棕色澄清液体，即为辣根过氧化物酶标记的呋喃妥因特异性抗体；

所述的呋喃妥因-BSA免疫原的制备方法为：

步骤一、免疫原制备：