[发明专利]LAMP-2抗原表位肽的纳米疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及LAMP-2抗原表位肽的纳米疫苗，以及其具体应用形式和制备方法。

背景技术

寡免疫复合物新月体肾炎（Pauci-immune crescentic glomerulonephritis，PICGN）是抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic autoantibodies，ANCA）相关性血管炎的局部表现，以血尿、蛋白尿、浮肿、高血压为主要临床表现，可导致迅速进展、不可逆转的肾功能衰竭。其特点是肾小球毛细血管壁很少或没有免疫复合物沉积，肾小球毛细血管襻坏死及新月体形成，中性粒细胞直接导致微小血管内皮及肾小球的损伤。病程进展凶险，在诊断1年后的病死率高达15%，即使采用及时、强有力的免疫抑制治疗，5年内死亡率仍高达35%以上。PICGN是国外最常见的新月体肾炎，占66%；在中国仅次于II型新月体肾炎，占25%。近年来发病率有迅速升高趋势，严重威胁人类健康。快速进入终末期肾病后，需要进行维持性血液透析或肾移植，为社会及家庭带来沉重的经济负担及社会负担。

就PICGN目前的治疗而言，大剂量糖皮质激素联合环磷酰胺冲击治疗是经典方案，但疗效有限，毒副作用大，使用剂量及疗程均受到制约。近年来采用的新型免疫抑制剂，如霉酚酸酯、环孢素A，FK506及抗肿瘤坏死因子α抗体等，疗效有限，同时还存在机会性感染的巨大风险，甚至致命的并发症。因此，迫切需要寻找有效而特异性治疗的新方法。

ANCA相关性血管炎属典型的自身免疫性疾病。治疗自身免疫性疾病的理想效果是消除自身抗原特异的自发免疫应答，而不干扰针对其他抗原的免疫应答。针对特异性靶抗原的治疗性疫苗符合这一原则。目前，多发性硬化病人的Cop1疫苗已受益于患者，而针对重症肌无力和胰岛素依赖型糖尿病的治疗性的合成肽疫苗研究也取得了很大的临床治疗进展。

自身免疫性疾病的发生机制主要是病原体通过分子模拟（Molecular Mimicry）机制打破免疫耐受：即病原体某些抗原表位与宿主组织蛋白的结构相同或相似，导致病原体刺激机体产生的免疫应答直接作用于结构相似的自身组分。ANCA相关性血管炎中，已证实的ANCA相关的靶抗原有中性粒细胞髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）及蛋白酶3（protease3，PR3），但一直未能找到感染与MPO或PR3相关的直接证据。抗溶酶体膜蛋白-2（Lysosomal membrane protein-2，LAMP-2)抗体是最近才发现的ANCA新亚型，该抗体几乎存在于所有的PICGN患者中，与病变的相关性是抗原MPO-ANCA及PR3-ANCA的2倍。在中性粒细胞内，LAMP-2可在溶酶体膜及胞膜之间穿梭，为循环抗体进入胞内提供了直接的通路，而PR3和MPO没有此功能。目前，抗LAMP-2抗体被认为是ANCA相关性血管炎更为特异而有效的标志。

药物传递系统领域中，纳米粒大小界定在1-1000nm之间。药物被分散、包封、吸附于聚合物粒子上，根据制备方法不同，可制成纳米球和纳米囊等，所用的聚合物为天然或合成的高分子材料。由于纳米粒在粒径小，比表面积大，能够增强药物在体内的溶解速率及口服生物利用度，对组织或细胞具有靶向作用并延长其在作用部位的作用时间，纳米载药系统已成为国内外医药学的重要研究方向。

聚乳酸（polylactic acid,PLA）及聚乳酸-羟基乙酸共聚物（poly(lactide-co-glycolide)acid,PLGA）是无毒的生物降解型聚合物，分别由乳酸、乳酸及羟基乙酸聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物降解性、生物相容性及无毒的特点，已由FDA批准上市并广泛应用于聚合物纳米粒的制备。

本发明针对目前国内外ANCA相关性血管炎特异性靶向治疗药物研究的空白及“瓶颈”问题，从免疫活性分子入手，运用纳米疫苗技术，将现代免疫学的新进展与药剂学有机结合，针对现有技术的不足进行了改进发明。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种LAMP-2抗原表位肽的纳米制剂，其具有治疗ANCA相关性血管炎的作用，特别是用于抗LAMP-2抗体相关性寡免疫复合物新月体肾炎的免疫治疗。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：