[发明专利]一种检测样品中金黄色葡萄球菌活菌体的方法在审
| 申请号： | 201310582449.9 | 申请日： | 2013-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN104655838A | 公开（公告）日： | 2015-05-27 |
| 发明（设计）人： | 杜美红;孙永军;刘清珺;杨寅;陈婷;陈舜琮 | 申请（专利权）人： | 北京市理化分析测试中心 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 李婉婉;张苗 |
| 地址： | 100089 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 样品 金黄色 葡萄球菌 菌体 方法 | ||
1.一种检测样品中金黄色葡萄球菌活菌体的方法，该方法包括：
（1）将能够特异地与金黄色葡萄球菌活菌体结合的抗体偶联在磁球上，得到免疫磁球；所述能够特异地与金黄色葡萄球菌活菌体结合的抗体不能与死菌体结合；
（2）将免疫磁球与液体形式的待测样品进行混合，得到混合后的物料；混合的条件使得当待测样品中存在金黄色葡萄球菌活菌体时，免疫磁球能够特异性地吸附金黄色葡萄球菌活菌体；
（3）将所述混合后的物料置于分选磁场中以固定免疫磁球，并洗脱未吸附在免疫磁球上的物质，得到洗脱后的免疫磁球；
（4）将吸附在免疫磁球上的物质进行提取DNA的操作，得到模板样品；
（5）使用针对所述金黄色葡萄球菌活菌体的特异性引物对模板样品进行PCR扩增，并根据PCR扩增产物中的目的片段的含量判断待测样品中的金黄色葡萄球菌活菌体的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述能够特异地与金黄色葡萄球菌活菌体结合的抗体为编号为CB100401的California Bioscience单克隆抗体。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，相对于每毫克的磁球，所述抗体的用量为0.05-2mg。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，相对于每毫升的液体形式的待测样品，以磁球的重量计，所述免疫磁球的用量为10-25μg。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤（3）中，洗脱所用的液体为磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液含有0.144-0.162mol/L的磷酸氢二钠和0.038-0.056mol/L的磷酸二氢钠。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，PCR扩增所用的引物包括如SEQ ID NO:1所示的正向引物和如SEQ ID NO:2所示的反向引物。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磁球为表面修饰有氨基或羧基的超顺磁性Fe3O4聚苯乙烯复合微球。
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