[发明专利]一种检测苯达松的化学发光酶联免疫分析法无效
申请号: | 201310585011.6 | 申请日: | 2013-11-20 |
公开(公告)号: | CN104655834A | 公开(公告)日: | 2015-05-27 |
发明(设计)人: | 洪霞;杜道林 | 申请(专利权)人: | 丹阳亿太生物科技发展有限公司 |
主分类号: | G01N33/545 | 分类号: | G01N33/545;G01N33/577;G01N21/76 |
代理公司: | 无 | 代理人: | 无 |
地址: | 212310 江苏省镇*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 苯达松 化学 发光 免疫 分析 | ||
技术领域
本发明涉及一种酶联免疫检测试剂盒,尤其涉及一种苯达松的化学发光酶联免疫检测试剂盒。
背景技术
苯达松为内吸、传导型芽后除草剂,是一种苯并噻二唑(简称BTH)类除草剂,又名灭草松、排草丹,对绝大多数双子叶植物(除大豆、花生外)和莎草科杂草有杀除作用,对禾本科植物无害,可用于水稻、小麦等多种农作物田间除草。苯达松在抗性植物中的代谢过程,一般认为首先将苯达松还原成为6-OH苯达松或8-OH苯达松,再将6-OH苯达松或8-OH苯达松叠合形成6-OH葡萄糖苷苯达松或8-OH葡萄糖苷苯达松,从而将有毒性、易转移的物质转变成为无毒性、难转移的甙类。
目前,检测苯达松的方法主要有:放射免疫法,高效液相色谱法(HPLC)、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。薄层色谱法的缺陷是:操作过程复杂,时间长;操作人员需要经过专业培训;影响分析的干扰因素较多,结果重复性差。放射免疫法,高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵,样品前处理复杂,费时,费力,不易普及,检测费用高,特别是放射免疫法还需要配备放射源,有一定危险性。鉴于此,建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测农作物(大豆、水稻、小麦、大麦等)中苯达松含量的方法具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种苯达松的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。
本发明所述苯达松的化学发光酶联免疫检测试剂盒,包括盒体,设在盒体内的酶标板和设在盒体内的苯达松系列标准溶液、酶标羊抗兔抗体、苯达松抗体、发光溶液、洗涤溶液、包被溶液及封闭溶液;其特征在于:
所述酶标板的各孔包被有以苯达松与卵清蛋白偶合制成的包被抗原,其中包被抗原浓度优选10μg/mL。
所述卵清蛋白的分子量范围优选6.7KDa~6.8KDa。
所述苯达松系列标准溶液分别是0mg/kg,0.1mg/kg,0.3mg/kg,0.9mg/kg,2.7mg/kg和8.1mg/kg所述酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液,其工作浓度优选为1:1000。
所述苯达松抗体是由苯达松与分子量范围是6.7KDa~6.8KDa的牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的多克隆抗体,其工作浓度优选为1:1000。
所述发光液是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH=8.8)和3/10000(体积比)H2O2的混合液。所述鲁米诺为发光底物,对甲苯酚为发光增强剂。
所述洗涤溶液是含有体积分数0.05%吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液。
所述包被溶液是每升水中含1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠的溶液,pH为9.5。
所述封闭溶液是每升洗涤溶液中含10g卵清蛋白(OVA,ovalbumin,也称鸡卵清白蛋白或鸡卵白蛋白,由386aa组成,分子量约43Kd)且加入重量分数0.5%NaN3的溶液。
本发明试剂盒最大检测范围为0.1mg/kg~8.1mg/kg。
本发明试剂盒中涉及的苯达松标准溶液、酶标羊抗兔抗体溶液、苯达松抗体溶液、发光溶液及洗涤溶液及其配方对本发明试剂盒检测的灵敏度影响很大;其中各溶液的主要成分及其配制方法是:
1、苯达松标准溶液:以常规方法配制浓度分别为0mg/kg,0.1mg/kg,0.3mg/kg,0.9mg/kg,2.7mg/kg和8.1mg/kg的苯达松标准溶液;
2、酶标羊抗兔抗体溶液:酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液,使用时用洗涤溶液配制成1:1000的工作浓度;
3、苯达松抗体溶液:苯达松抗体是用人工免疫抗原免疫动物制得的多克隆抗体,将所得苯达松抗体用洗涤溶液稀释成1:1000的工作浓度;
4、发光溶液:是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH=8.8)和3/10000(体积比)H2O2的混合液;
5、洗涤溶液:指含有体积分数0.05%吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液;
6、包被溶液:1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L水中,调节pH为9.5;
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