[发明专利]顶空气相色谱法测定红霉素发酵尾气中丙醇含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物原料检测技术领域，特别是涉及一种顶空气相色谱法测定红霉素发酵尾气中丙醇含量的方法。 

背景技术

红霉素(erythromycin，Er)是大环内酯类抗生素，是由红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea)经三级发酵，合成的次级代谢产物，临床上主要用于抑制革兰氏阳性菌。发酵前期会在发酵液中加入前提物质正丙醇，目的是提高发酵液中红霉素效价。加入的正丙醇一部分被细菌利用，一部分随着空气挥发。为了考察正丙醇加入量、微生物利用量、挥发量间的关系，必须对发酵尾气中正丙醇含量进行检测。 

发明内容

本发明的目的就在于建立一种能测定红霉素发酵尾气中丙醇含量的方法。 

为实现上述发明目的所采取的技术方案为：样品准备：将发酵尾气通过细管，导入20ml顶空瓶底部，并保持10～15min，立即取出导管，加塞，并用铝盖钳紧。对照准备：用微量移液器移取丙醇对照品0.5～1μl，置20ml顶空瓶内，加塞，并用铝盖钳紧。操作：取装有样品及对照的顶空瓶，置顶空进样器内，按顶空气相色谱法进行检测。顶空进样器条件为：样品瓶加热温度为90℃，加热时间20～30min，定量环温度100℃，传输管温度110℃，进样量为1ml。气相色谱条件为：色谱柱：聚乙二醇20000，0.53mm×30m，膜厚1.0μm。柱温110℃，运行15min。载气为氮气，流速3ml/min。 

具体实施方式

1 顶空条件：样品瓶加热温度为90℃，加热时间20～30min，定量环温度100℃，传输管温度110℃，进样量为1ml。 

2 色谱条件： 

色谱柱：聚乙二醇20000，0.53mm×30m，膜厚1.0μm；载气为氮气，流速3ml/min。柱温110℃，运行15min，进样口温度为150℃ 

3 样品准备：将发酵液尾气通过细管，导入20ml顶空瓶底部，并保持10～15min，立即取出导管，加塞，并用铝盖钳紧。对照准备：用微量移液器移取丙醇对照品0.5～1μl，置20ml顶空瓶内，加塞，并用铝盖钳紧。

4 测定：取装有样品及对照的顶空瓶，置顶空进样器内，按顶空气相色谱法进行检测。 

实施例1、 

1 顶空条件：样品瓶加热温度为90℃，加热时间20min，定量环温度100℃，传输管温度110℃，进样量为1ml。

2 色谱条件： 

色谱柱：HP-INNOwax 30m×0.53mm，膜厚1.0μm；载气为氮气，流速3ml/min。柱温110℃，运行15min，进样口温度为150℃。

3 样品准备：将发酵液尾气通过细管，导入20ml顶空瓶底部，保持10min，立即取出导管，加塞，并用铝盖钳紧。对照准备：用微量移液器移取丙醇对照品0.5μl，置20ml顶空瓶内，加塞，并用铝盖钳紧。 

3 测定： 

取装有样品及对照的顶空瓶，置顶空进样器内，按顶空气相色谱法进行检测。

供试品批号：130721，供试品来源：宁夏启元药业有限公司 

测定结果：0.18ppm

实施例2

1 顶空条件：样品瓶加热温度为90℃，加热时间25min，定量环温度100℃，传输管温度110℃，进样量为1ml。

2 色谱条件： 

色谱柱：HP-INNOwax 30m×0.53mm，膜厚1.0μm；载气为氮气，流速3ml/min。柱温110℃，运行15min，进样口温度为150℃。

3 样品准备：将发酵液尾气通过细管，导入20ml顶空瓶底部，保持12min，立即取出导管，加塞，并用铝盖钳紧。对照准备：用微量移液器移取丙醇对照品0.8μl，置20ml顶空瓶内，加塞，并用铝盖钳紧。 

3 测定： 

取装有样品及对照的顶空瓶，置顶空进样器内，按顶空气相色谱法进行检测。

供试品批号：130722，供试品来源：宁夏启元药业有限公司 

测定结果：0.23ppm

实施例3

1 顶空条件：样品瓶加热温度为90℃，加热时间30min，定量环温度100℃，传输管温度110℃，进样量为1ml。

2 色谱条件： 

色谱柱：HP-INNOwax 30m×0.53mm，膜厚1.0μm；载气为氮气，流速3ml/min。柱温110℃，运行15min，进样口温度为150℃。