[发明专利]粉葛组织培养快速育苗方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养繁殖技术领域，一种粉葛组织培养快速育苗方法。

背景技术

粉葛（Puerariae lobata var.Thomsonii）,为豆科（Leguminosae）葛属（Pueraria）植物。在我国有8种及2变种，主要分布于西南部、中南部至东南部，长江以北少见。粉葛的食用部分为块根，俗称“葛根”。

葛根是我国卫生部认定的药食两用的山地植物。葛根味甘，辛，性平，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻之功；葛根素（异黄酮类化合物）含量高，具有降低血压、降低心肌耗氧量、减慢心率、扩张冠血状管改善正常和缺血心肌的代谢，改善脑循环和外周循环等作用。随着现代医药、食品科技的不断发展，葛根的药理、药化、临床应用、食品开发研究等发面的不断深入，其使用价值越来越引起人们的关注，被誉为“亚洲人参”。世界粮农组织等权威机构预测，全球葛根需求量将至5000万吨/年（折合2000万亩）。

此外，粉葛淀粉含量高，一些优良品种淀粉含量可高达25%，7.5kg鲜粉葛即可生产燃料乙醇1kg。单位面积土地的乙醇生产率粉葛高于玉米、甘薯等粮食作物，而且粉葛生物固氮效率高，耐贫瘠，具有充分挖掘土地潜力的优势。粉葛作为非粮食生物质新材料，避免了“与民争粮，与粮争地”的瓶颈，具有巨大的开发利用价值。

大巴山粉葛（Pueraria lobata(wild)Ohwi'Dabashan'）是由达州市林业科技推广站从野生葛品种中驯化的良种，2010年通过四川省林木品种审定委员会审定（登记编号为：川R-WTS-PL-023-2009），成为秦巴山区发展粉葛产业主推的主导品种，发展面积增长迅速，对种苗需求量大。

目前大巴山粉葛的繁殖主要以压条和扦插繁殖传统方法为主，繁殖系数低，获得的种苗数量有限，无法满足当前农业生产上的需求，如何提供大量优质的种苗成为当前亟待解决的问题。

植物组织培养快速繁殖是当代农业生物技术在生产上应用最广泛、产生经济效益最大的一个领域。组织培养快速繁殖种苗具有其独特的优越性，首先繁殖系数大，能以比常规方法快数千到数百万倍的速度进行扩大繁殖，及时提供大量优质种苗，使一个新的品种能够在短时间内满足生产的需要，加速引种和良种的推广进程；使用的繁殖材料小和少；繁殖苗木整齐一致，商品性高，能够保持原品种的优良特性；可进行周年工厂化育苗，生产效率高。对一些繁殖系数低、不能用种子繁殖（无种子或种子繁殖后代出现种性的衰退）的植物品种的繁殖，利用组织培养快速繁殖更为重要。

目前，虽然已有葛属京西葛、粉葛、美国葛藤、泰国葛和野葛几个品种的组织培养育苗技术专利与报道发表，但不同物种，甚至同一物种、不同品种之间，其组织培养方法也有很大的差异性。大巴山粉葛是一个新品种，还尚无组织培养快速育苗的报道。而且，粉葛组织培养还存在这一些问题：野外取材很难保证母本的遗传品质；粉葛葛藤上绒毛多，污染率高，难以建立无菌体系；增殖率低。因此，寻求并探索大巴山粉葛组织培养快速繁殖育苗技术，是扩大大巴山粉葛种源生产，解决生产中种苗需求的迫切任务。

发明内容

本发明目的是提供一种粉葛组织培养育苗方法，利用组织培养技术，提高粉葛的繁殖系数，培育出遗传性状稳定的粉葛无性系。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种粉葛组织培养快速育苗方法，包括如下步骤：

（1）预处理将优株块根进行盆栽，放置在温室大棚中，待其发出芽藤蔓长至20cm，开始喷洒1%多菌灵溶液，每周一次，持续一个半月，藤蔓长至1m时开始取材；

（2）无菌材料体系的建立选取当年生粉葛葛藤，剪去叶片和叶柄，切割成1.0～1.5cm长带有腋芽的茎段，将带芽茎段置于自来水下冲洗30min，然后用洗衣粉液浸泡10～30min，用软刷刷洗茎段后再置流水下冲洗1～2h，在超净工作台上，将洗涤好的茎段用质量浓度为75％酒精浸泡15～20s，无菌水冲洗2～4次，然后用0.1％的氯化汞浸泡3～5min，无菌水冲洗4～6次再用2%次氯酸钠处理8～10min，无菌水冲洗4～6次，用滤纸吸干带芽茎段获得无菌材料；

（3）诱导培养将上述步骤获得的无菌带芽茎段先接种到1/2MS培养基上，黑暗条件下培养10～15d，减少褐化发生，然后转入芽诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，按光照和黑暗时间比为2:1交替进行诱导培养；

（4）芽的增殖芽诱导培养25±2d，腋芽萌发生长至1～1.5cm，将其全部转入增殖培养基进行反复增殖，获得大量的增殖苗后转入生根培养；