[发明专利]一种复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1及其制备方法和其在治疗肿瘤中的用途在审
| 申请号： | 201310585973.1 | 申请日： | 2013-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN104388466A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 都会;郑义;李智龙 | 申请（专利权）人： | 深圳市金佳禾生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/66;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 深圳市中联专利代理有限公司 44274 | 代理人： | 李俊 |
| 地址： | 518020 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 复制 缺陷 重组 病毒 rad rnai socs1 及其 制备 方法 治疗 肿瘤 中的 用途 | ||
1.一种复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，该制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1表达如下序列的双链RNA：
5’-GATCCCTACCTGAGTTCCTTCCCCTTCAAGAGAGGGGAAGGAACTCAGGTAGTTTTTTG-3’；
5’-AATTCAAAAAACTACCTGAGTTCCTTCCCCTCTCTTGAAGGGGAAGGAACTCAGGTAGG-3’。
2.如权利要求1所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1的表达系统为Adeno-X。
3.如权利要求1所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1感染树突状细胞（DCs）,并使DCs内的SOCS1表达沉默。
4.如权利要求1所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1的病毒滴度为2.5-2.8X107pfu/ml。
5.如权利要求1所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1感染DCs后，用合成的HPV16E7.49-57表位多肽脉冲被腺病毒感染的DCs，用TNF-α使DCs成熟，与自身外周血体外扩增的CIK细胞继续共培养后一周回输体内，对肿瘤细胞进行特异性杀伤。
6.如权利要求1所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1感染DCs后，与免疫效应细胞CTL、NK、γ δ T和TIL细胞联合使用治疗肿瘤。
7.如权利要求1-6任一项所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1，其特征在于，所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1的制备方法如下：
1）将所述双链RNA的编码DNA插入Adeno-X表达系统的RNAi-Ready pSIRN-Shuttle的多克隆位点，得到重组表达载体RNAi-SOCS1-pShuttle；
2）用PI-Sce I与I-Ceu I双酶切所述重组表达载体RNAi-SOCS1-pShuttle，将得到的含有所述双链RNA的编码DNA的酶切片段与Adeno-X表达系统的Adeno-X病毒DNA连接，将得到的连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，得到重组腺病毒DNA，再将该重组腺病毒DNA转染HEK293细胞，得到复制缺陷型重组腺病毒。
8.如权利要求1-6任一项所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1在治疗肿瘤中的用途。
9.如权利要求1-6任一项所述的复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1在治疗宫颈癌中的用途。
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