[发明专利]鉴定大丽轮枝菌致病型的方法和试剂盒及含有的核酸和引物对

说明书

技术领域

本发明涉及农作物病害防治领域，具体地，涉及一种核酸、一种引物对、一种鉴定真菌菌株致病型的方法和一种试剂盒。

背景技术

大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)是一种植物致病真菌，它可以导致植物（特别是棉花）发生黄萎病等病害。但是，不同的大丽轮枝菌菌株的致病型差别很大，例如某些致病型高的菌株感染棉花后会导致棉花的严重病害而引起农田产量的下降，而某些致病型低的菌株感染棉花后仅导致棉花的轻微病害且对农田产量影响较小。此外，大丽轮枝菌的致病型还表现出一定的潜伏性，即当年感染的高致病型菌株可能不致病，而在次年大范围地严重致病。

如果能够检测出农田中大丽轮枝菌的主要菌株类型，并对其致病型作出准确的判断，就可以结合药物防治和轮作等农业手段抑制病害的发生，从而增加经济效益和社会效益。

发明内容

本发明的目的是解决如何准确判断大丽轮枝菌菌株的致病型的技术问题，提供一种核酸、一种引物对、一种鉴定真菌菌株致病型的方法和一种试剂盒。

SEQ ID NO：1所示的序列为本发明人发现的在高致病型的大丽轮枝菌菌株的基因组序列中不出现而在低致病型的大丽轮枝菌的基因组序列中出现的序列。因而，对于某一致病型待测的大丽轮枝菌菌株，只要鉴定该大丽轮枝菌菌株的基因组的序列中是否存在SEQ ID NO：1所示的序列，即可获知该大丽轮枝菌菌株是否为高致病型大丽轮枝菌。具体地，如果鉴定出该大丽轮枝菌菌株的基因组的序列中不存在SEQ ID NO：1所示的序列，则判断该大丽轮枝菌菌株属于高致病型；如果鉴定出该大丽轮枝菌菌株的基因组的序列中存在SEQ ID NO：1所示的序列，则判断该大丽轮枝菌菌株不属于高致病型。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供一种核酸，该核酸具有SEQ ID NO：1所示的序列。

另一方面，本发明还提供了扩增如上所述的核酸的引物对，该引物对包括SEQ ID NO：2所示的正向引物和SEQ ID NO：3所示的反向引物。

另一方面，本发明还提供了一种鉴定真菌菌株致病型的方法，所述真菌菌株为大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)，该方法包括以下步骤：（1）制备含有大丽轮枝菌的全基因组DNA的待测样本；（2）以步骤（1）中得到的全基因组DNA待测样本为模板，使用如上所述的引物对进行PCR扩增；检测扩增产物中是否存在SEQ ID NO：4所示的核酸；（3）根据步骤（2）的检测结果判断大丽轮枝菌菌株的致病型，在所述扩增产物中不存在SEQ ID No：4所示的核酸的情况下，则指示所述大丽轮枝菌的菌株属于高致病型；在所述扩增产物中存在SEQ ID NO：4所示的核酸的情况下，则指示该大丽轮枝菌的菌株不属于高致病型。

另一方面，本发明还提供了一种试剂盒，所述试剂盒含有如上所述的引物对，以及PCR试剂和/或分子杂交试剂。

通过上述技术方案，本发明鉴定的高致病型的大丽轮枝菌的导致棉花发生黄萎病的平均病情指数为70.2；本发明鉴定的低致病型的大丽轮枝菌的导致棉花发生黄萎病的平均病情指数为11.0。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

一方面，本发明提供一种核酸，该核酸具有SEQ ID NO：1所示的序列。

另一方面，本发明还提供了扩增如上所述的核酸的引物对，该引物对包括SEQ ID NO：2所示的正向引物（5’-CCCATCACCTTCAGCGACAT-3’）和SEQ ID NO：3所示的反向引物（5’-AGCCTTTGAGCGAGACACCC-3’）。

另一方面，本发明还提供了一种鉴定真菌菌株致病型的方法，所述真菌菌株为大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)，该方法包括以下步骤：（1）制备含有大丽轮枝菌的全基因组DNA的待测样本；（2）以步骤（1）中得到的全基因组DNA待测样本为模板，使用如上所述的引物对进行PCR扩增；检测扩增产物中是否存在SEQ ID NO：4所示的核酸；（3）根据步骤（2）的检测结果判断大丽轮枝菌菌株的致病型，在所述扩增产物中不存在SEQ ID No：4所示的核酸的情况下，则指示所述大丽轮枝菌的菌株属于高致病型；在所述扩增产物中存在SEQ ID NO：4所示的核酸的情况下，则指示该大丽轮枝菌的菌株不属于高致病型。