[发明专利]用指纹图谱法控制八味獐牙菜丸质量的检测方法

权利要求书

1.一种用指纹图谱法控制八味獐牙菜丸质量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

制定色谱条件：流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱：0～25min，甲醇为10%→30%；25～40min，甲醇为30%→45%；40～50min，甲醇为45%→60%；检测波长：237 nm；进样量10μL；

对照品溶液的制备：精密称取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成0.3 mg·mL^-１的对照品溶液；

供试品溶液的制备：取八味獐牙菜丸适量，粉碎，研细，混匀，取0.5g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟、功率为250W、频率为33KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

八味獐牙菜丸质量的测定：吸取上述对照溶液和供试品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，并根据液相色谱仪显示的对应的对照溶液HPLC色谱图、供试品溶液HPLC色谱图来建立八味獐牙菜丸指纹图谱，根据建立的八味獐牙菜丸指纹图谱来确定八味獐牙菜丸中所含成分。

2.如权利要求1所述的用指纹图谱法控制八味獐牙菜丸质量的检测方法，其特征在于：“八味獐牙菜丸质量的测定”的步骤具体为：

精密度实验：取八味獐牙菜丸供试品溶液，在所述色谱条件下，连续进样5次，测定HPLC色谱图，结果共有峰相对峰面积的RSD小于1.0%，相对保留时间的RSD小于1.0%，表明仪器精密度良好；

稳定性实验：取八味獐牙菜丸供试品溶液，在上述色谱条件下，每6h进行分析, 测定HPLC色谱图，结果共有峰相对峰面积的RSD小于3.0%，相对保留时间的RSD小于3.0%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好；

重复性实验：按样品制备方法平行制备5份八味獐牙菜丸供试品溶液，测定HPLC色谱图，结果共有峰相对峰面积的RSD小于3.0%，相对保留时间的RSD小于3.0%，表明方法重复性良好；

根据对照溶液HPLC色谱图中显示的与该对照溶液的药材相对应的峰来确定供试品溶液HPLC色谱图中八味獐牙菜丸中各味药的共有峰；

根据供试品溶液HPLC色谱图中的共有峰的相对保留时间、共有峰面积比值建立八味獐牙菜丸的指纹图谱。

3.如权利要求2所述的用指纹图谱法控制八味獐牙菜丸质量的检测方法，其特征在于：“根据供试品溶液HPLC色谱图中的共有峰的相对保留时间、共有峰面积比值建立八味獐牙菜丸的指纹图谱”的步骤具体为：

参照物的选择：在供试品溶液HPLC图谱中选择峰面积较大、出峰时间适中并且稳定的色谱峰作为参照峰，结果保留时间为29.2min的色谱峰符合此条件，经对照品溶液HPLC图谱对照认定保留时间为29.2min为獐牙菜苦苷的吸收峰，故选择獐牙菜苦苷为参照物；

共有峰的确定：取10批自制的八味獐牙菜丸供试品，按所述色谱条件、及供试品溶液制备方法进行HPLC分析，确定了12个共有峰，并对八味獐牙菜丸、缺獐牙菜丸、单味丸的样品，按相同条件下进行HPLC分析认定峰来源，通过对照分析，认定一个共有峰来源于榜嘎，6个共有峰2、3、5、10、11来源于小檗皮，共有峰4、6、7、8、9、12来源于獐牙菜，兔耳草、角茴香、波棱瓜子、岩参、木香对指纹图谱的共有峰没有贡献；

根据共有峰的相对保留时间、相对峰面积计算指纹图谱的相似度： 以国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统， 2004A版进行匹配，确定12个共有峰；以獐牙菜苦苷色谱峰的保留时间和峰面积积分值为1，各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均在3.0%以内；以12个共有峰的峰面积的均值做模版，利用“相关系数”法和“夹角余弦”法计算指纹图谱的相似度。