[发明专利]制备板栗蛋白质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及制备板栗蛋白质的方法。

背景技术

板栗中含蛋白质5%～11%，含量高于稻米，并且赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苏氨酸，缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等氨基酸的含量超过FAO/WHO的标准，而赖氨酸是水稻，小麦，玉米，和大豆类的第一限制性氨基酸，苏氨酸是水稻，小麦的第二限制性氨基酸，色氨酸和蛋氨酸分别是玉米和豆类的第二限制性氨基酸。由此可见，食用板栗或者直接食用板栗蛋白质可以补充禾谷类和豆类中限制氨基酸的不足，可使膳食的营养成分更加完善。

然而，现阶段提取制备板栗蛋白质的方法仍有待改进。

发明内容

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

国内外对板栗蛋白的提取方法主要有两种，一种是传统的碱水法，这种方法的缺点是提取率低。另一种是亚临界水萃取法，这种方法的缺点是提取蛋白的过程容易造成蛋白的变性。

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种提取率高、蛋白活性好的制备板栗蛋白的方法。

根据本发明的一个方面，本发明提出了一种制备板栗蛋白的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：将板栗粉水溶液进行超声波破碎处理，以便获得经过超声波破碎处理的板栗粉水溶液；利用纤维素酶对所述经过超声波破碎处理的板栗粉水溶液进行第一酶解处理，以便获得第一酶解产物；利用第一α-淀粉酶将所述第一酶解产物进行第二酶解处理，以便获得第二酶解产物；将所述第二酶解处理产物进行碱提处理，以便获得碱提产物；将所述碱提产物进行第一离心，并收集上清液，以便获得蛋白质碱提液；利用第二α-淀粉酶将所述蛋白质碱提液进行第三酶解处理，以便获得第三酶解产物；利用等电点沉淀法将所述第三酶解产物进行酸沉，以便获得酸沉产物；将所述酸沉产物依次进行静置和第二离心，以便收集获得沉淀；以及将所述沉淀进行水洗至中性，以便获得所述板栗蛋白质。发明人惊奇地发现，利用本发明的方法能够有效提取制备板栗蛋白，并且板栗蛋白提取率高，活性好。具体地，本发明的方法利用超声波和纤维素酶进行酶解作用促进板栗蛋白的溶出，且利用α-淀粉酶酶解破坏蛋白质（在本文中有时也将“蛋白质”简称为“蛋白”）与淀粉的包络作用，从而有效提高了板栗蛋白的提取率，蛋白提取率可高达66%，相对于传统方法提高了20%，并且获得的板栗蛋白中蛋白含量可高达88%，纯度高，质量好，并且由于提取条件温和，能够很好地保持板栗蛋白的活性。

另外，根据本发明上述实施例的制备板栗蛋白质的方法还可以具有如下附加的技术特征：

需要说明的是，适用于本发明的原料包括鲜板栗、干燥过的板栗、板栗粉。本发明的方法中所采用的主要萃取剂为去离子水。原料的品种、品质以及蛋白的含量，对终产品的品质与得率将产生一定的影响，但均比采用现有技术制备板栗蛋白质的效率高，品质好。

根据本发明的实施例，于400w超声功率下，进行超声波细胞破碎处理6-14min，优选10min。由此，能够使细胞结构松动，加强后续纤维素酶的作用效果。根据本发明的实施例，所述板栗粉水溶液的料液比为1g：15ml。换句话说，所述板栗粉水溶液是通过将板栗粉和水按照1g：15ml的比例混合配制获得的。由此，有利于后续蛋白的溶出和提取。此外，需要说明的是，前述的板栗粉可以通过以下方法制备获得：选用无霉变虫蛀的新鲜板栗为原料，经过去皮、切片、冷冻干燥后经粉碎机粉碎，过60目筛制成板栗粉。

根据本发明的实施例，于40-60摄氏度优选50摄氏度，pH4-6优选pH4.5条件下进行所述第一酶解处理5-15min，优选10min。由此，能够有效促进板栗蛋白溶出，且能够保持蛋白活性。根据本发明的另一些实施例，进行所述第一酶解处理时，所述纤维素酶与所述经过超声波破碎处理的板栗粉水溶液的比例为50-150U/g，优选100U/g。由此，能够有效破坏细胞壁促进蛋白溶出，有利于后续的蛋白提取。

根据本发明的实施例，于30-50摄氏度优选40摄氏度，pH5.5-6.5优选pH6.1条件下进行所述第二酶解处理25-35min，优选30min。由此，能够使板栗淀粉有效酶解，进而能够有效解除淀粉对蛋白质的包络，从而有利于蛋白溶出。根据本发明的另一些实施例，进行所述第二酶解处理时，所述第一α-淀粉酶与所述第一酶解产物的比例为80-160U/g，优选120U/g。由此，能够有效提高板栗淀粉的酶解效率，去除淀粉对蛋白质的包络，且能够保持蛋白质的活性。