[发明专利]一种基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法

权利要求书

1.一种基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）利用青胫隐性白羽鸡作为父本，白来航鸡作为母本进行杂交，生产出F1代；

（2）F1代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡；

（3）利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法测定F2代青胫白羽公母鸡的基因型，选留显性白羽位点为ii基因型的个体，淘汰显性白羽位点为II和Ii基因型的个体，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡；

（4）取显性白羽位点为ii基因型的青胫白羽公母鸡自交，利用步骤（3）的方法测定自交后代的基因型，重复上述步骤至稳定遗传，得到显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系。

2.根据权利要求1所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述步骤（1）中青胫隐性白羽鸡为青胫黄麻羽地方鸡突变后的青胫白羽鸡。

3.根据权利要求1所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述步骤（3）中利用人工引入PvuII的RFLP-PCR方法，包括以下步骤：以包含PMEL17基因的待测鸡全基因组DNA为模板，以引物对P为引物PCR扩增PMEL17基因第十外显子，得到扩增片段；对扩增片段进行PvuⅡ酶切，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡显性白羽位点的基因型；

所述的引物对P为：

上游引物P-F：5’-AGTGGCACCACGCTCACCGTGGGGCAGCT-3’，

下游引物P-R：5’-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。

4.根据权利要求3所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述的PCR扩增反应体系为：2×Taq PCR MasterMix 6.25μL，ddH₂O 4.25μL，P-F 0.5μL，P-R 0.5μL，DNA模板1.0μL。

5.根据权利要求3所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述的PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸20s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。

6.根据权利要求3所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述的PvuⅡ酶切反应体系为：扩增片段10μL，Buffer 1.5μL，PvuⅡ 0.3μL，ddH₂O 3.2μL；PvuⅡ酶切反应条件为：37℃，酶切过夜。

7.根据权利要求3所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述的琼脂糖凝胶的质量浓度为2%；琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为60min。

8.根据权利要求3所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述的鉴定鸡显性白羽位点基因型的方法为：II基因型表现为160bp条带；Ii基因型表现为124bp和160bp条带；ii基因型表现为124bp。

9.根据权利要求1所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：将步骤（4）得到的显性白羽位点为ii基因型的青胫隐性白羽鸡品系与青胫黄麻羽鸡品种杂交配套，生产出有色羽肉鸡。

10.根据权利要求9所述的基于分子辅助选择的青胫隐性白羽鸡品系的培育方法，其特征在于：所述的青胫黄麻羽鸡品种为固始鸡、边鸡、淮北麻鸡、淮南麻黄鸡、五华鸡、崇仁麻鸡、琅琊鸡、卢氏鸡、桃源鸡、瑶鸡或茶花鸡。