[发明专利]一种从植物榨汁提取蛋白酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质提取纯化技术，具体说是一种从植物榨计提取蛋白酶的方法。

背景技术

植物蛋白酶是由纯化的真菌Rhizomucor pusillus受控发酵，经提纯制备的微生物凝结酶。用于干酪、干酪素的生产和替代动物体来源的凝结酶。乳白色至浅灰色粉末。

蛋白质的提取纯化方法主要有盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀、离子交换层析、单宁沉淀、亲和层析、超滤浓缩等方法。但是，单独使用上述方法中的其中一种技术，提取纯化植物蛋白酶的效果并不好。本发明首先将去除沉淀物的植物榨汁超滤浓缩，然后再加入 硫酸铵来沉淀其中的植物蛋白酶，一方面可以在超滤过程中除去一部分小分子的蛋白质，另一方面则可大量减少硫酸铵的用量，降低了生产成本，也减少了环境污染，植物蛋白酶成品的活力高、质量好。

发明内容

本发明首先将去除沉淀物的植物榨汁超滤浓缩，然后再加入硫酸铵来沉淀其中的植物蛋白酶，可以在超滤时除去分子量小的蛋白质，还可以大量减少硫酸铵的用量，降低了成本，减少了环境污染，植物蛋白酶成品的活力高、质量好。

本发明通过以下技术方案予以实现：

一种从植物榨计提取植物蛋白酶的方法，包括如下步骤：

1)榨汁，将新鲜植物渣压榨，得到植物榨汁；

(2) 过滤，将植物榨计过滤，去掉粗渣，得到去除粗渣的滤液；

(3) 离心，将去粗渣的粗酶液离心，得到透明粗酶液；

(4) 超滤浓缩，将透明粗酶液超滤浓缩，得到浓缩酶液；

(5) 硫酸铵沉淀，在浓缩酶液中加入硫酸铵，使酶盐析、沉淀得到酶沉淀物；

(6) 离心，将酶沉淀物进行离心收取膏状的酶膏；

(7) 干燥和粉碎，将酶膏干燥，粉碎，得粉状的蛋白酶成品。

优选的是，所述的新鲜植物渣为去纤维后的新鲜植物渣。

优选的是，所述步骤 (2) 的过滤为采用 200 目滤布的过滤。

优选的是，所述步骤(3)的离心是用高速碟片离心机离心，转速为4500转/分钟?7000转/分钟。

优选的是，所述步骤 (4)的超滤浓缩，使用5000?15000道尔顿的超滤膜，工作压力为正0.02MPa?0.05MPa ，温度为8℃?22℃，浓缩比为8倍。

优选的是，所述步骤(5)的硫酸接浓度为10%?40%。

优选的是，所述步骤(6)的离心，转速为3500转/分钟?6000 转/分钟。

优选的是，所述步骤(7)的干燥为冷冻干燥，温度为-7℃?-40℃。

本发明的有益效果为：能耗少、成本底，工艺简单，回收率高，节能环保。提取的植物蛋白酶成品的纯度高，质量好。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。实施例中的植物为剑麻。

实施例 1

将新鲜植物渣进行压榨，得到蛋白酶活力约为2000活力单位/毫升的植物榨汁；

用180目滤布将植物榨计过滤，去除其中的粗杂质，得到去除粗渣的滤液；用碟片离心机将滤液离心，去除其中的颗粒细微的杂质，得到透明粗酶液；超滤浓缩，使用15000道尔顿的超滤膜，在工作压力为0.1MPa，温度10℃条件下，将透明粗酶液超滤浓缩至原体积的15%，得到蛋白酶活力为12000t力单位/毫升的浓缩酶液；在浓缩酶液中加硫酸铵至终浓度45%，使酶盐析、沉淀；用无孔三足离心机离心收集膏状的酶膏；将酶膏冷冻干燥，然后 将所得的干燥酶块粉碎，得粉状的蛋白酶成品，酶活力达到145万单位/克。

实施例2

将新鲜植物渣进行压榨，得到蛋白酶活力约为3000活力单位/毫升的植物榨汁；用180目滤布将植物榨计过滤，去除其中的粗杂质，得到去除粗渣的滤液；用碟片离心机将滤液离心，去除其中的颗粒细微的杂质，得到透明粗酶液；超滤浓缩，使用15000道尔顿的超滤膜，在工作压力为0.06MPa ，温度为12℃条件下，将透明粗酶液超滤浓缩至原体积的10%，得到蛋白酶活力为28000活力单位/毫升的浓缩酶液；在浓缩酶液中加硫酸铵至终浓度25% ，用碟片离心机离心，去除沉淀(杂质)；在其酶液中补加硫酸铵至终浓度36%，使酶盐析、沉淀；用无孔三足离心机离心收集膏状的酶膏；将酶膏冷冻干燥，然后将所得的干燥酶块粉碎，得粉状的蛋白酶成品，酶活力达到156万单位/克。

实施例 3

将新鲜植物渣进行压榨，得到蛋白酶活力约为2600活力单位/毫升的植物榨汁；用180目滤布将植物榨计过滤，去除其中的粗杂质，得到去除粗渣的滤液；用碟片离心机将滤液离心，去除其中的颗粒细微的杂质，得到透明粗酶液；超滤浓缩，使用18000道尔顿的超滤膜，在互作压力为0.20MPa，温度为20℃条件下，将透明粗酶液超滤浓缩至原体积的11%，得到蛋白酶活力为29000活力单位/毫升的浓缩酶液；在浓缩酶液中加硫酸铵至终浓度45%，用碟片离心机离心，去除沉淀(杂质)；在其酶液中补加硫酸铵至终浓度55%，使酶盐析、沉淀；用无孔三足离心机离心收集膏状的酶膏；将酶膏冷冻干燥，然后将所得的干燥酶块粉碎，得粉状的蛋白酶成品，酶活力达到157万单位/克。