[发明专利]一种用于人体移植的生物椎间盘

权利要求书

1.一种用于人体移植的生物椎间盘，其制备步骤如下：

步骤一：采集椎间盘：以遗体捐献者为椎间盘供体，无菌条件下采集椎间盘若干个备用，所述椎间盘包括髓核、纤维环、软骨终板和两端0.4-0.6mm的软骨下板；

步骤二：髓核细胞转染：将所述椎间盘的髓核组织用胶原酶进行消化，于细胞培养箱中培养；取第2代细胞接种于细胞培养板，饱和湿度培养；用hBMP7转染所述髓核细胞，收集备用；

步骤三：生物活性椎间盘的体外构建：用注射器将步骤二获得的转染后的髓核细胞悬液注入步骤一所述椎间盘，制得用于人体移植的生物椎间盘。

2.按照权利要求1所述的用于人体移植的生物椎间盘，其特征在于，步骤二中，将所述椎间盘的髓核组织剪成1mm³的组织块后用胶原酶进行消化。

3.按照权利要求1所述的用于人体移植的生物椎间盘，其特征在于，储存标本椎间盘的方法为，采集后立即放入添加10%FCS和DMSO的培养基，并置入4℃的冰箱中过夜；过夜后依次按-20℃ 2小时、-40℃ 2小时、-80℃ 2小时程序置入液氮罐中保存备用。

4.按照权利要求1所述的用于人体移植的生物椎间盘，其特征在于，步骤三中的注入方法为，自所述椎间盘正中后部纤维环垂直刺入5-7mm，以缓慢均匀压力施压，至注射器刻度显示注入20μl时将注射器针头向后退出3mm，维持1min后完全退出；将注射后的椎间盘立刻置入完全培养基中，竖直置入细胞培养箱中继续培养至7天备用。

5.按照权利要求3所述的用于植入体内的生物椎间盘，其特征在于，所述培养基中添加10%FCS和DMSO的毫升数比例1︰1。

6.按照权利要求1所述的用于植入体内的生物椎间盘，其特征在于,步骤二用于髓核组织消化的胶原酶为0.1%的Ⅱ型胶原酶。