[发明专利]一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法

权利要求书

1.一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法，其特征在于：组培茎段选择与处理、组培芽诱导、继代增殖扩繁、丛生芽伸长和壮芽培养等组培技术体系，获得优质高脂松树芽，其操作步骤如下：

（1）组培茎段选择与处理  

高脂松树的组培茎段芽选自年产松脂4-4.5kg/a.株的高脂松树穗条嫁接成活的植株，剪取春季萌发的半木质化嫩枝稍，长6-10cm,用苯扎溴铵按常规方法清洗，然后用自来水冲洗十浸泡15min，洗去嫩枝稍上的尘埃和苯扎溴铵，再将嫩枝稍裁成1-2cm长的茎段，视木质化程度分类置放容器内，用0.1%新吉尔灭浸泡10-15min，在无菌条件下，用0.15%HgCl₂灭菌消毒3-5min，无菌水冲洗3-4次，再用0.1%HgCl₂灭菌消毒4-6min，无菌水冲洗4-5次后，将灭菌消毒的茎段放在无菌滤纸上将水吸干；

（2）组培芽诱导

将无菌茎段放入诱导培养基中进行组培芽诱导，组培芽诱导的方法是：先置温度7-10℃的环境,暗培养5-7d，再转入温度20-25℃,光照强度1200-2000lux,光照12-14h/d条件下培养50-60d，形成初代芽；

（3）芽继代增殖扩繁

将初代芽接入增殖扩繁培养基中进行继代增殖扩繁，继代增殖扩繁控制温度17-20℃光照强度2000-4000lux，光照10-14h/d，培养5-7d，再在温度20-25℃，光照强度2000-4000lux，光照10-14h/d的条件下培养15-20d，经2-3次继代增殖扩繁周期形成丛生芽,平均增殖系数6.95以上；

（4）丛生芽伸长

将高＜1cm的芽丛接入伸长培养基中进行丛生芽伸长，丛生芽伸长控制温度17-20℃，光照强度2000-4000lux，光照10-14h/d，培养5-7d，再在温度22-25℃，光照强度2000-4000lux，光照10-14h/d的条件下培养20-25d，得到长2-3cm的伸长丛生芽；

（5）壮芽培养

将高≥2cm的单芽切下，插入壮芽培养基中，温度20-25℃，光照强度2000-4000lux，光照10-14h/d，培养壮芽；将＜1cm的芽丛，接入继代增殖扩繁培养基中，继续进行丛生芽的增殖扩繁培养。

2.根据权利要求1所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法，其特征在于：所述的诱导培养基配方为：1/2改良DCR十6-BA3-5mg/L十NAA0.5-1.0mg/L十VC15 mg/L 十椰子汁40-60ml/L十琼脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L。

3.根据权利要求1所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法，其特征在于：所述的增殖扩繁培养基配方为:1/2改良DCR十6-BA0.5-3mg/L十NAA0.05-0.5mg/L十VC15mg/L十椰子汁10-30ml/L十琼脂粉3.8g/L十蔗糖20g/L。

4.根据权利要求1所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法，其特征在于：所述的伸长培养基配方为：改良DCR十6-BA0.1-0.3mg/L十NAA0.05-0.2mg/L十椰子汁10-20ml/L十活性碳3g/L十琼脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。

5.根据权利要求1所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法，其特征在于：所述的壮芽培养基配方为：改良DCR十琼脂粉4.0g/L十蔗糖20g/L。

6.根据权利要求1所述的一种高脂松树茎段组培芽诱导和增殖培养的方法，其特征在于：所述的改良DCR培养基配方为：DCR十NH₄NO₃250 mg/L十谷氨酰胺5mg/L。