[发明专利]辣椒杂交种纯度检测EST-SSR分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子标记领域，具体涉及辣椒杂交种纯度检测EST-SSR分子标记及其应用。

背景技术

辣椒属于茄科辣椒属一年或多年生草本植物。辣椒以其果实特有的辣味、色泽和营养成分成为一种重要的世界性蔬菜作物。大量研究表明辣椒果实中含有的抗氧化类物质可以保护生物有机体免受氧化伤害和提高机体免疫力。另外，辣椒中辣椒素类物质能够加速能量和脂类的新陈代谢及降低癌症细胞的发生率。随着大众对辣椒营养成分和药用成分的充分认识，栽培面积逐年增加。

种子是主要的农业生产资料，种子纯度是种子质量的核心指标，直接影响农产品质量和优良品种的增产潜力，开展作物种子纯度检测对保证种子质量具有重要意义。作物品种纯度鉴定的常用方法主要包括种子形态鉴定、田间种植形态鉴定和同工酶电泳技术鉴定等。种子形态易受环境条件影响，鉴定结果准确性较差；田间种植形态鉴定存在周期较长，成本较高，工作量较大，并且表型易受栽培措施和环境条件的影响，严重影响品种纯度鉴定的效率及准确性，越来越不能满足育种工作和生产经营的需要；利用同工酶技术鉴定作物品种纯度虽然准确、可靠，但同工酶标记具有组织和器官特异性，信息量非常有限，多态性不够丰富。

随着辣椒新品种数量的不断增加，传统的鉴定方法难以有效区分遗传关系较近的杂交种。分子标记技术能够从DNA水平上揭示子代与亲本间的遗传差异，不受环境条件和栽培措施的影响，无组织、器官及发育特异性，能够检测微小的变异，不受植株生长季节的限制，多态性丰富、稳定性高，可以大大缩短鉴定时间。DNA分子标记技术的迅速发展，使得从基因组水平上检测辣椒杂交种纯度成为可能。

‘热辣1号’是中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所经多年研究选育出的微辣丰产青皮尖椒。该杂交组合播种至开花约59天，至大量收获约105天。始收时株高55～60cm，生长势极强，分枝能力强，枝叶茂盛。每亩鲜椒产量4000～5000kg，单果重62.0g左右，果长21.0～26.0cm，果宽3.3～3.7cm，果肉厚0.3～0.4cm，辣度指数4352SHU，红熟果维生素C含量1.62mg g^-1。抗黄瓜花叶病毒病，田间表现耐热、较耐涝，较抗青枯病和枯萎病，耐疫病、炭疽病。本品种适宜的栽培区域为全国各个辣椒主产区，最适宜为两广、海南等不嗜辣地区。

EST-SSR（expressed sequence tag-simple sequence repeat）标记，是根据EST序列中的简单串联重复序列开发的一种标记类型，是一类由几个核苷酸为重复单位组成的串联重复序列，根据串联重复单位数目的差异检测多态性。辣椒EST-SSR标记具有多态性丰富、共显性遗传、稳定性和重复性较好、对DNA质量要求不高、操作简单易行、不受环境因素影响等优点，与基因组SSR标记相比，EST-SSR标记不仅降低了开发成本、提高了开发效率，而且节省了开发时间，显著提高了其利用价值。近年来，随着辣椒基因组工程的发展，辣椒丰富的EST序列资源为EST-SSR标记的开发提供了便利条件。目前辣椒杂交种纯度的EST-SSR鉴定方法尚未见报道。

发明内容

针对传统作物杂交种纯度检验方法易受环境条件和栽培措施的影响，鉴定周期较长，成本较高，鉴定结果准确性较差，费时费力等缺点。

本发明的一个目的，是提供一种辣椒杂交种纯度检测的EST-SSR分子标记，其对应的核苷酸序列如下：

引物名称正向引物反向引物HE45’-AATGGGAAGAGAAATTGTGAAAGCA-3’5’-TTCAATGCCAACAATGGCATCCTA-3’

所述的EST-SSR分子标记可应用于辣椒杂交种纯度的检测。