[发明专利]一株可降解三乙胺的索氏菌、选育方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于环境有机污染物生物处理技术领域，具体涉及一株降解三乙胺的细菌、选育方法及其在废水生物处理和环境污染修复中的应用。

背景技术

    三乙胺（TEA）有广泛的用途，在化工行业中被用作溶剂和催化剂，在有机合成材料中作为原料，三乙胺有毒并具有强烈的氨臭味。在一些工业废水中三乙胺含量很高，严重威胁环境和人类的健康。因此，将三乙胺从环境中去除是非常重要的。目前，三乙胺的去除方法主要分为三类：物理法、化学法和生物降解法。但由于物理化学法处理三乙胺废水成本高，通常会有二次污染。因此，一般更倾向于用生物降解法处理三乙胺。

    生物降解法是一种有效去除有机物的方法，因为成本低、有完全降解的可能性。目前，用生物法处理三乙胺的研究少之甚少，能降解三乙胺的纯菌株包括假单胞菌属RA1，分支杆菌属RA2和节杆菌属R4，它们能以三乙胺作为唯一的碳源和氮源。然而，至今并未出现关于索氏菌(Thaurea sp.)降解三乙胺的报道。此外，目前已报道的大部分三乙胺降解菌对三乙胺的耐受浓度低（小于100mg/L），降解速率慢，难以满足实际工程应用的要求。降解效率高、对三乙胺耐受浓度高、能适应真实环境的的新型、高效降解菌的筛选具有十分重要的意义。

发明内容

    本发明的目的在于针对目前三乙胺降解菌株对三乙胺耐受浓度低、处理效率低、菌株种类较为单一等不足，提供一株可高效降解三乙胺的新型菌株(Thaurea sp.) T12。

    本发明的另一目的在于提供一株可高效降解三乙胺的新型菌株(Thaurea sp.) T12的选育方法。

    本发明还有一个目的是提供(Thaurea sp.) T12在含三乙胺废水处理领域的应用。

    实现本发明目的技术解决方案是：本发明从南京市某污水处理厂长期处理含三乙胺废水的二沉池污泥中分离、筛选得到了三乙胺特效降解菌株T12，经鉴定为索氏菌（Thaurea sp.），命名为（Thaurea sp.）T12，GenBank登陆号为KF019186，菌株已于2013年10月17日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO: M 2013477。该菌株为国内外第一株可用于三乙胺废水处理的索式菌。

一株可高效降解三乙胺的新型菌株（Thaureasp.）T12的选育方法，包括以下步骤：

（1）菌株的驯化：取10 mL长期用来处理三乙胺的污泥水与200 mLMSM无机盐液体培养基混合，放入500 mL锥形瓶中，150转/分转速、30℃摇床培养6h，过滤弃去沉淀，将滤液按接种量5%转接到含100 mg/L三乙胺的MSM无机盐液体培养基中，150转/分转速、30℃培养48h后，重复该过程直至三乙胺基本去除，然后再以7 d为一个驯化周期，三乙胺按100mg/L浓度差递增，驯化4个周期后得到菌悬液；

（2）菌株的分离：将所得的菌悬液用无菌水按10倍逐级稀释到10⁶-10⁹倍，涂布于以三乙胺为唯一碳氮源的MSM无机盐固体培养基上，放入培养箱中30℃倒置培养，随时观察菌株的生长情况，72h后挑取单菌落，在含400 mg/L三乙胺的MSM无机盐固体培养基中进行划线分离纯化，重复数次，得到单菌落，并进行斜面保存；

（3）菌株的筛选：挑取分离所得到的单菌落，分别接种于含400mg/L三乙胺的MSM无机盐液体培养基中，摇床培养56 h，测定培养基中三乙胺浓度变化，并选取培养基中三乙胺浓度显著降低的单菌落。

一株可降解三乙胺的索氏菌的应用，将上述培养得到的菌株T12制备成种子液，用于三乙胺的废水处理中，废水pH值为7-8，废水中三乙胺浓度不大于400mg/L。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明所提供的（Thaureasp.）T12，可以以三乙胺为唯一碳源、氮源进行生长。本发明直接采用以三乙胺为唯一碳源和氮源的培养基进行三乙胺降解菌的富集，并采用以三乙胺为唯一碳源、氮源的筛选培养基进行分离，筛选过程迅速快捷，在该培养基上杂菌较少，减少了复筛的工作量。