[发明专利]西藏大花红景天提取物在制备抗肠道炎症药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及西藏大花红景天提取物在制备抗肠道炎症药物中的应用，涉及中药领域和果蝇天然免疫技术领域。

背景技术

肠粘膜每天接触大量的食物、细菌和病毒等不同的抗原类物质，在肠道中，宿主对病原微生物产生免疫反应，对食物抗原及其它正常的肠腔内容物产生免疫耐受等，都需肠粘膜屏障发挥作用。对抗病原微生物的肠粘膜免疫可分为先天性免疫和后天获得性免疫，其中先天性免疫构成肠粘膜屏障的基础。肠道先天性免疫是肠道重要的防御机制，是宿主抵御病原微生物和有害物质的第一道防线。

果蝇缺乏哺乳动物所具有的获得性免疫系统，即体内没有T细胞和B细胞，也没有抗体和补体系统，只能通过天然免疫系统对病原微生物的侵染做出应答。另外，果蝇和哺乳动物的肠道具有相似的结构和功能；肠道干细胞的分化机制以及天然免疫机制也十分相似。因此，可以利用果蝇作为研究哺乳动物免疫反应的模型，更重要的是可以利用其揭示与人类相关疾病的产生。当果蝇肠道受到外界环境刺激时，其肠道上皮细胞会对内部和外部因子做出应答，如产生活性氧（reactive oxygen species，ROS）和各种抗菌肽（antibacterial peptides）等来清除入侵的病原微生物，从而维持肠道内环境稳态。

大花红景天[Rhodiola crenulata(Hook,f.et thoms.)H.Ohba]为景天科（Crassulaceae）红景天属（Rhodiola）的多年生草本或亚灌木植物，主要分布西藏、四川和云南等西部地区。大花红景天的化学成分主要有红景天苷、大花红景天素、酪醇、红景天多糖、黄酮类化合物、酚类化合物等，其中红景天苷为其主要有效成分。研究表明红景天具有增强免疫、抗疲劳、耐缺氧、抗肿瘤、防辐射、抗病毒、和保护器官免受自由基损伤等多方面药理作用。但至今为止，对西藏大花红景天提取物抗肠道炎症方面的研究未见报道。

发明内容

本发明的目的是揭示出西藏大花红景天提取物在制备抗肠道炎症药物中的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

首先分别利用病原微生物Beauveria bassiana的孢子、Micrococcus luteus和表面活性剂SDS喂食果蝇来建立果蝇肠道免疫功能损伤模型，即诱发果蝇肠道炎症，通过比较有无添加大花红景天提取物对果蝇生存率、肠道上皮细胞死亡情况、肠道内抗菌肽的表达量、肠道上皮细胞ROS水平和肠道形态学变化等指标的影响来探究大花红景天提取物对肠道炎症损伤的修复作用。结果发现该提取物具有很好的抗炎、抗氧化、清除自由基等活性，可用于制备抗肠道炎症的药物。

附图说明

图1为西藏大花红景天提取物对真菌M.luteus、B.bassiana和致炎因子SDS处理后果蝇生存率的影响；

图2为西藏大花红景天提取物对SDS处理后果蝇肠道上皮细胞的影响；

图3为西藏大花红景天提取物对B.bassiana感染后肠道内抗菌肽表达量的影响；

图4为西藏大花红景天提取物对SDS处理后果蝇肠道上皮细胞内ROS水平的影响；

图5为西藏大花红景天提取物对SDS处理后肠道形态和肠道壁厚度的影响。

具体实施方式

实施例1西藏大花红景天提取液的制备

称取西藏大花红景天干燥根20g，粉碎后于200mL去离子水中浸泡12h，小火加热煮沸3h，过滤，再加入200mL去离子水用同样的方法提取2次，合并3次提取液浓缩至200mL，即获得0.1g/ml（10%）的红景天提取液，4℃密封储存备用。高效液相色谱法测定大花红景天提取液含红景天苷不低于0.5%，符合《中国药典》2010年版（一部）的质量标准。

实施例2西藏大花红景天提取物对真菌B.bassiana、M.luteus和致炎因子SDS处理后果蝇生存率的影响

B.bassiana孢子液的制备：将B.bassiana涂布到新鲜LB固体培养基上，25℃静置培养7d，培养基上的孢子用无菌PBS收集后过滤，测定孢子浓度。孢子离心后弃上清，在沉淀中加入5%蔗糖溶液(对照组)或含5%蔗糖的大花红景天提取液(实验组)，配制成A₆₀₀=40的孢子溶液，4℃储存备用。