[发明专利]一种调控油脂酵母发酵产生的微生物油脂的脂肪酸组成的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物化工领域，具体涉及一种调控油脂酵母发酵产生的微生物油脂的脂肪酸组成的方法。

背景技术：

微生物油脂，又称单细胞油脂(Single Cell Oil,SCO)，是指由微生物在一定条件下合成并储存在菌体内的甘油脂，其脂肪酸组成与一般的植物油脂相似，主要是C₁₆、C₁₈系脂肪酸，如棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚麻酸等。某些微生物如细菌、酵母、霉菌、微藻能够利用碳水化合物、碳氢化合物和普通油脂作为碳源积累大量油脂，如果油脂积累量能超过细胞干重的20%的微生物，即称为产油微生物(Oleaginous microorganisms)。

长期以来，微生物油脂作为一种重要的油脂原料，一直是生物化工重要的研究对象。微生物油脂可以用作食品上重要油脂的替代品(如可可脂等)，还可以提供有益人类健康的各类功能性油脂，最近，微生物油脂还被用于生物柴油的原料。总体而言，微生物油脂的油脂脂肪酸组成决定了微生物油脂的用途。通过现代分子生物学手段可以改变菌株油脂的结构与组成，但基因改造一般周期较长，且对于油脂微生物，有效的生物分子信息不多。因此，寻找一种简单、高效、周期短的微生物油脂改造方法十分重要。

发明内容：

本发明的目的是提供一种调控油脂酵母发酵产生的微生物油脂的脂肪酸组成的方法。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种调控油脂酵母发酵产生的微生物油脂的脂肪酸组成的方法，包括以下步骤:

a、在适合油脂酵母油脂发酵的发酵培养基中添加C1～C5的短链水溶性有机酸，得到含有短链水溶性有机酸的发酵培养基；所述短链水溶性有机酸的添加量为1-30g/L；

b、油脂酵母在步骤a得到的含有短链水溶性有机酸的发酵培养基中进行油脂发酵，培养温度20-35℃，初始发酵pH为4.5-9.0，油脂酵母的接种体积跟发酵培养基的体积比为1-20%；

c、发酵后通过有机溶剂提取微生物油脂，从而获得脂肪酸组成改变的微生物油脂。

所述适合油脂酵母油脂发酵的发酵培养基包括适合油脂酵母油脂发酵的一切天然培养基、半合成培养基与合成培养基（参见文献Huang et al.,Biotechnology Advances,2013,31,129-139;Papanikolaou et al.,European Journal of Lipid Science and Technology,113,1031-1051）。

所述C1～C5的短链水溶性有机酸优选为乙酸、甲酸、丁酸或乙酰丙酸。

所述油脂酵母选自皮状丝孢酵母、粘红酵母、圆红冬孢酵母、斯达油脂酵母、浅白隐球酵母、解脂亚罗酵母、Trichosporon dermatis、Trichosporon coremiiforme中的任一种。

所述微生物油脂的提取方法为适合油脂酵母的油脂提取方法为现有技术，如专利号为201210132659.3所公开的方法，有机溶剂选自氯仿/甲醇、正己烷/甲醇或者石油醚/甲醇等亲疏水性两相溶剂。

本发明提供了一种调控油脂酵母发酵产生的微生物油脂的脂肪酸组成的方法，不依靠分子生物学手段、简单可行，避免了使用分子生物学手段改造油脂酵母发酵产生的微生物油脂脂肪酸组成需要较长的改造周期。

具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

种子培养基(g/L)：木糖20，蛋白胨10，酵母抽提物10，pH6.0。

含有甲酸的发酵培养基(g/L)：葡萄糖2.9，木糖37.9，阿拉伯糖4.9，蛋白胨1.8，酵母抽提物0.5，MgSO₄·7H₂O0.3，KCl0.4，MnSO₄·H₂O0.003，CuSO₄·5H₂O0.003，甲酸18；pH7.0。

对照组发酵培养基中不添加任何有机酸。

接种2或3环皮状丝孢酵母到装有50mL的活化后的种子培养基的250mL锥形瓶中，在28℃下150r/min培养24h，得到强壮的种子液。将跟发酵培养基的体积比为5%的种子液接种于装有50mL含有甲酸的发酵培养基的250mL锥形瓶中，28℃培养8天。发酵后通过有机溶剂提取微生物油脂。