[发明专利]一种伯克霍尔德氏菌FH4菌株及其筛选方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，特别涉及一种伯克霍尔德氏菌FH4菌株及其筛选方法和应用。 

背景技术

目前，世界石油资源供应渐趋紧张、环境污染日益严重，能源问题也越来越受到人们的关注。近两年来，各大能源消费国竞先寻求替代石油的新能源，生物乙醇燃料以其突出的环保性和可再生性，受到许多国家的重视和积极扶持。生物乙醇作为可再生资源，可减少对石油的消耗，能直接作为液体燃料或者同汽油混合使用。 

2007年开始，我国黄海海域连续7年爆发大规模浒苔，浒苔糖类成分分析结果显示，其纤维素含量为13.3%、半纤维素含量为28.01%、淀粉含量为2.475%、水溶性多糖含量为11.503%、水溶性戊聚糖含量11.25%。纤维素是由葡萄糖以β-1，4-糖苷键连接而成的线状大分子物质，是地球上最丰富的多糖物质。1904年，在蜗牛消化液中人们首次发现了纤维素酶，从此，对于纤维素酶的研究日益深入。纤维素酶并不是单一酶，是一个酶系的总称。浒苔中的纤维素是用于制取生物乙醇的主要成分，在对浒苔中的纤维素降解时，一般采用商品纤维素酶，但是，商品纤维素酶成本较高，纤维素酶解过程对环境造成污染，不适合大规模工业生产。 

发明内容

本发明的目的是提供一种伯克霍尔德氏菌FH4菌株，该菌株可分泌纤维素酶，对浒苔中的纤维素类物质有降解效果，可将纤维素有效降解为还原糖，为浒苔进一步能源化利用奠定了基础。 

本发明的另一目的是提供一种伯克霍尔德氏菌FH4菌株的筛选方法。 

本发明的另一目的是提供一种伯克霍尔德氏菌FH4菌株酶解浒苔的应用方法。 

为了实现以上技术效果，本发明通过如下技术方案来实现： 

一种伯克霍尔德氏菌FH4菌株，其特征在于：保藏号为CGMCC No.8271。 

上述伯克霍尔德氏菌FH4菌株的筛选方法，其步骤包括： 

（1）将腐烂的浒苔藻体的悬液加入到选择培养基中，摇床培养2-3天； 

（2）将步骤（1）中的选择培养液经梯度稀释后的菌悬液，涂布在鉴别培养基上，待菌落长出； 

（3）在长出菌落的平板上用刚果红染色法筛选有透明圈的菌株，并用平板划线分离法分离、提纯。 

所述步骤（1）中，腐烂的浒苔藻体的悬液与选择培养基的体积比为1:25-45；摇床培养的温度为25-35℃，转速为135-145r/min。 

所述步骤（1）中，选择培养基中的组分包括纤维素粉、硝酸钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母膏、水解酪素及陈海水，各组分的加入配比依次为3-5g：1g：0.3-0.5g：1.1-1.3g：0.8-1g：0.4-0.5g：0.4-0.5g：0.4-0.5g：950-1050mL。 

所述步骤（2）中，鉴别培养基中的组分包括羧甲基纤维素钠、酵母膏、磷酸二氢钾、琼脂、土豆汁及陈海水，各组分的加入配比依次为5-10g：1g：0.1-0.3g：12-16g：90-110mL：950-1050mL。 

上述伯克霍尔德氏菌FH4菌株酶解浒苔的应用方法： 

（a）将伯克霍尔德氏菌FH4菌株于LB液体培养基中振荡培养22-26小时，然后在菌液中加入冻存缓冲液，于-20℃保存； 

（b）将步骤（a）中的伯克霍尔德氏菌FH4菌株于LB斜面培养基中斜面活化培养，然后挑取一满环于LB液体培养基中，振荡培养24h后取1mL菌液于已灭菌纤维素液体发酵培养基中，振荡培养5-7天；将发酵液低温离心，取上清液为粗酶液或是将发酵液过滤，取滤液为粗酶液；（c）将干净的浒苔干燥、粉碎，然后与步骤（b）中的粗酶液于45-55℃条件下反应45-50小时。 

所述步骤（a）中，振荡培养的温度为25-35℃，转速为135-145r/min； 所述缓冲液是体积浓度为45-55%的甘油，缓冲液与LB培养基的体积比为1：1-1.5。 

所述步骤（b）中，振荡培养的温度为30-35℃，转速为135-145r/min；离心分离温度为3-5℃，离心转速为3500-4500r/min，离心时间为10-20分钟。 

所述步骤（b）中，纤维素液体发酵培养基中的组分包括酵母浸膏、蛋白胨、羧甲基纤维素钠及陈海水，各组分的加入配比依次为1g：3-6g：8-12g：950-1050mL。 

所述步骤（c）中，将干净的浒苔于55-65℃下干燥10-14小时，然后粉碎至70-90目；浒苔与粗酶液的加入量比为1g：45-55mL。