[发明专利]一种疏血通注射液的抗凝血酶活性测定方法

权利要求书

1.一种疏血通注射液的抗凝血酶活性测定方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

所述疏血通注射液用如下方法制得：将水蛭和地龙分别用2～4倍体积的生理盐水浸渍，反复冻融提取15～30小时，多次过滤，以体积百分数计算，将33％～84％的水蛭生理盐水提取液与16％～67％的地龙生理盐水提取液的比例混合。

(1)精密量取疏血通注射液适量，浓缩富集至一定浓度，作为供试品溶液；

(2)精密量取供试品溶液10～200μl，置适宜白瓷点滴板中，加入含纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(pH5.0～10.0)20～400μl，搅匀，置水浴(30～45℃)温热0～30min；

(3)滴加每1ml中含5～50单位的凝血酶溶液(边滴加边轻轻搅匀)至出现整块可挑起透明凝胶状沉淀，记录消耗凝血酶溶液的体积；

(4)按下式计算抗凝血酶活性：U=C₁V₁／(C₂V₂)；式中U--每1ml疏血通原液中含凝血酶活性单位，U／ml；C₁--凝血酶溶液的浓度，U／ml；C₂--供试品溶液的浓度，ml原液·ml^-1；V₁--消耗凝血酶溶液的体积，μl；V₂--供试品溶液的加入量，μl；中和一个单位的凝血酶的量，为一个抗凝血酶活性单位。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于该方法步骤(1)获得的供试品溶液浓缩方式包括且不限于减压浓缩、常压浓缩、薄膜浓缩、冷冻干燥等，优选50～60℃减压浓缩。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于该方法步骤(1)中供试品溶液的浓度范围为1.0～10.0ml原液·ml^-1，更进一步优选的浓度范围为2.0～5.0ml原液·ml^-1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于该方法还包括：

(1)供试品的取样量进一步优选为50～120μl，置适宜白瓷板中；加入的纤维蛋白原可以是不同来源(生产厂家、品牌等)，浓度可控制在0.1％～5.0％，更进一步优选浓度为0.3％～0.7％。

(2)加入纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液pH进一步优化为6.0～8.0，且临用配制；加入纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液量进一步优化为100～240μl；水域温度进一步优化为37℃±0.5℃，温热时间优化为3～6min。

(3)滴加凝血酶可以是不同来源(生产厂家、品牌等)，浓度进一步优化为每1ml含8～12单位；滴加凝血酶溶液时，可以选用解剖针作为搅拌器材，搅拌的频率范围为0～60次／min；滴加的速度为每1～5min滴加1次，每次1～10μl。