[发明专利]一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于农业技术领域，涉及一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法及应用。

背景技术

早在40年代，人们就发现，往土壤中加入某些可抑制脲酶活性的化合物能延缓尿素的水解。60年代人们开始了大量的脲酶抑制剂筛选工作，发现氨荒酸盐、含硼化合物、尿素衍生物、原子量大于50的重金属、含氟化合物、多元酚及多元醌和抗代谢物等对脲酶活性具抑制作用；Burn,R.G（1978）认为酚类和醌类是比较有希望的脲酶抑制剂，其中多元酚醌的效果好于单元酚醌；Bremner等（1971）证实，酚醌对脲酶的抑制效果比无机物好；Bundy等（1973）对醌的同系物研究表明，被卤素取代的P-苯醌对脲酶抑制效率较高；Mishra（1979）发现，在100ppm时，除蒽醌外，1.4-萘醌等许多醌类化合物均有抑制脲酶活性和抑制硝化作用；Rodgers等（1984）用5种氨基甲酚进行试验表明，4-氨基邻甲酚和4-氨基间甲酚对脲酶活性有显著的抑制作用；Calamea等（1984）用¹⁵N标记的尿素，开展了氢醌（HQ）对尿素氮利用率影响的研究，发现HQ能促进植株对土壤氮和尿素氮的吸收；Bremner（1978）指出，HQ是最有希望的抑制剂；周礼恺（1988）等发现10mg/5公斤土的HQ可使春小麦增产10％，提高尿素氮利用率3.7％,减少尿素氮的损失率4.7％；汤树德等（1993）报道HQ能有效抑制土壤中尿素氮的挥发；张春兴（1996）报道尿素混拌HQ作基肥施用可以减慢尿素分解速度和挥发速度，提高玉米和水稻的产量；从Held（1977)发现磷酸胺类化合物可作为脲酶抑制剂以来，相继有不少这类化合物作为脲酶抑制剂申请了专利；Martens（1984）用10余个磷酸胺类化合物进行试验表明，在10PPm时，这些化合物抑制尿素水解百分率从11％至93％不等，其中0-苯基磷酰二胺（PPD）抑制率最高；Vlek（1980）发现，在水田中2％的PPD（与尿素重量比）与尿素一起施用,可减少氨的挥发；Kampte（1982）的工作表明,PPD可显著减少尿素氮以氨的形式损失；Byrnes（1983）报道,5％PPD与尿素表施或混施后，氨的挥发减少了2％；Tomar等（1984）发现，2％的PPD有延缓尿素水解的趋势；NBPT（N-丁基硫代磷酰三胺）是另一类效果较好的脲酶抑制剂；Bremner和Krogmeier（1988）报道，当NBPT的用量0.01％时，尿素肥料对种子萌发的负效应大为减少；王小彬（1995）报道了春小麦施尿素时，配用NBPT因减缓了尿素的水解和减少了NH3的挥发；Phongpans等（1995）报道，NBPT与PPD一起施用时，尿素N的挥发损失从15％降低至少3％；唐建阳等（1998）报道稻田配合尿素施用NBPT对水稻有增产效果；陈济深等（1996）报道微生物代谢产物I36N抑制脲酶活性较NBPT特久而有效。但是由于各抑制剂或存在成本过高或存在对环境的污染和应用效果不稳定的情况，目前仍无一抑制剂得到大面积的推广应用。我们多年来在进行脲酶抑制剂筛选工作中，首次发现女贞叶提取物对脲酶具强烈抑制作用。并且具有用量少，作用迅速且持久的特性。

尿素是目前世界及我国农业生产中应用面积最广,数量最多的一种氮肥。但尿素施用到土壤中，经脲酶分解成碳酸铵，作物来不及吸收,碳酸铵便以氨的形式挥发，造成肥效降低，一般尿素肥效仅达30～50%。若能抑制土壤中脲酶的活性，使尿素缓慢分解成碳酸铵，作物对尿素氮的利用率则可大大提高。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法及应用，揭示了以女贞叶为原料，以有机溶剂作溶剂辅以微波作粗提，再用丙烯酰胺层析纯化提取脲酶抑制成分-即尿素增效剂，并以该尿素增效剂用于抑制脲酶提高尿素氮利用的试验。其抑酶率达到71.2%，尿素氮利用提高了。揭示出该成果巨大的应用前景。

其技术方案如下：

一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法，包括以下步骤：

A.女贞叶中脲酶抑制成分粗提

A1女贞叶脲酶抑制剂成分的超声波辅助提取

称取40g女贞叶粉末，加入800mL60%的乙醇溶液，进行微波辅助提取2min，微波功率为231W，再进行水提，水提温度60℃，时间30min，每隔10min轻轻摇匀，浸提所得粗液进行离心，转速为5000r/min，离心时间为15min，得浸提上清液；

A2提取液减压浓缩、萃取