[发明专利]基于量子点的赭曲霉毒素A的sFLISA快速检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种基于量子点的赭曲霉毒素A的sFLISA快速检测方法，其特征在于：兔抗赭曲霉毒素A多克隆抗体作为捕获抗体，生物素标记的鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体作为检测抗体，量子点标记的链霉亲和素作为荧光探针，通过亲和素-生物素之间的级联放大效应，能灵敏特异地进行赭曲霉毒素A的定量检测，与黄曲霉毒素B1等无交叉反应；

具体包括下列步骤：

（一）兔抗赭曲霉毒素A多克隆抗体的包被

用pH 9.6的0.05 mol/L碳酸盐缓冲液将兔抗赭曲霉毒素A多克隆抗体稀释成浓度为2.5μg/mL包被酶标板，每孔100μL，42℃孵育0.5 h，倒去包被液，用1×PBST洗涤3次，3min/次，甩干；

（二）封闭

用1× BSA-PBS溶液封闭板上的空白位点，每孔200μL，37℃孵育2 h，倒去封闭液，用1×PBST洗涤3次，3min/次，甩干；

（三）加待检样品

相应孔加一定稀释倍数的标准品或待测样品100μL，阴性对照孔加100μL的1× BSA-PBS，37℃孵育1 h，用1×PBST洗涤3次，3min/次，甩干；

（四）加生物素标记的鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体

除试剂空白孔外，其余各孔加生物素化抗体100 μL ，37℃孵育1 h，用1×PBST洗涤3次，3 min/次，甩干；

（五）加量子点标记的链霉亲和素

所有相应孔加100 μL用TBS缓冲液1:100稀释的量子点标记的链霉亲和素，37℃孵育1 h，用1×PBST洗涤3次，3min/次，甩干；

（六）相对荧光强度检测

在多功能荧光酶标仪上以390nm为激发波长，605nm为发射波长，选择底读模式，测量相对荧光强度（RFU，relative fluorescence units），减去试剂空白孔的相对荧光强度，得到相对荧光强度值；

（七）建立标准曲线并计算待测样品中的赭曲霉毒素A的浓度

根据赭曲霉毒素A浓度和相应的相对荧光强度建立了标准曲线，在0.39 μg/L～125 μg/L之间，赭曲霉毒素A浓度与相对荧光强度呈线性关系，线性回归方程为y=0.0207x+0.196（线性相关系数R²=0.9938，y为相对荧光强度，x为赭曲霉毒素A的浓度（μg/L））；根据标准曲线回归方程可计算出样品的赭曲霉毒素A的浓度。

2.一种基于量子点的赭曲霉毒素A的sFLISA检测试剂盒，包括：

（1）酶标板1块：包括12条，每条含有8个小孔，每个孔中均包被有兔抗赭曲霉毒素A多克隆抗体；

（2）稀释板1块：没有包被的12条8孔板；

（3）6瓶赭曲霉毒素A标准品浓度分别为：0、0.39、0.79、1.56、3.125、6.25、12.5、25、50、125 μg/L，每瓶1.5 mL；

（4）生物素标记的鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体：10 mL；

（5）量子点标记的链霉亲和素：10 mL。