[发明专利]磁性分子印迹聚合物-荧光分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析方法。

背景技术

三嗪类农药是重要的除草剂，已开发有近40种，我国常用10余种，年产量、贸易占有量、使用量均居各类除草剂之首。随着三嗪类除草剂的广泛使用，其不当使用或过量使用所造成的危害已日益显露。三嗪类除草剂及其代谢产物在土壤和水中的残留，不仅对后茬作物生长产生很大的影响，而且随着其在农作物产品中的积累进入食物链，可造成人畜慢性或急性中毒。特别是阿特拉津等含氯三嗪农药因可产生致突变作用已被多个国家认定为环境内分泌干扰物，其残留问题受到广泛关注和重视。

磁性分离技术是目前一项快速发展并广泛应用于化学、分子生物学、医学工程等领域的新兴技术。此技术可以在磁力作用下将磁性组分从非磁性组分中快速分离出来，从而实现快速富集纯化的目的。磁性分子印迹聚合物微球（MMIPMs）这一新型复合材料就是将分子印迹聚合物包覆在磁性纳米粒子的表面形成。由于分子印迹聚合物具有对特定物质即模板分子的选择性识别与吸附能力，结合磁性纳米粒子具有的磁性吸附能力后，就可以实现对特定目标化合物的特异性识别、捕获以及快速富集与纯化等步骤一次性完成，操作简便、快捷。将其结合于高灵敏度的化学分析方法时，就能够对痕量待测物进行有效快速地分析。

分子荧光光谱法又称荧光分光光度法或荧光分析法。当试样接受了某一波长的光（紫外光或可见光）照射，分子即吸收了紫外或可见光的辐射能量，其电子能级跃迁至激发态，之后又以辐射的形式释放能量，使分子回到基态，在这个过程中分子从激发态回到基态发出的辐射就是荧光。荧光的一个特点是当激发光停止时，发光过程几乎也立即停止。此外荧光一般只发生在有π电子共轭的平面结构或刚性结构的分子中。π电子共轭程度越大或者是分子平面度越大，荧光的强度也越大。因此，分子荧光光谱可以有效测试带有π电子共轭结构的分子的浓度，而实现高灵敏度检测。

目前的小分子化合物快速检测方法多采用基于抗原抗体结合的免疫反应，其核心材料抗体制备困难、周期长且种类有限，大大限制了小分子农药检测工作的开展。

发明内容

本发明要解决现有快速检测方法中小分子天然抗体难以制备的问题，而提供磁性分子印迹聚合物-荧光分析方法。

磁性分子印迹聚合物-荧光分析方法，具体是按照以下步骤进行的：

一、将FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O溶解在100mL去离子水中，在氮气保护条件下，水浴加热至温度为60℃～70℃，加入碱溶液至生成黑色沉淀，在搅拌条件下保持20min～40min，再加入聚乙二醇和油酸，得到修饰后的磁性纳米粒子；

其中，FeCl₃·6H₂O的质量为2.7g，FeSO₄·7H₂O的质量1.7g，碱溶液的浓度为的1.0mol/L，聚乙二醇的质量为1g，油酸的体积为2mL；

二、将1mmol扑灭津、4mmol甲基丙烯酸、2mL溶剂和30mL致孔剂混合，超声处理30min，在避光条件下控制温度为4℃，保持10h～12h，再向体系中加入2mL交联剂和0.2g步骤一得到的修饰后的磁性纳米粒子，混合均匀，通氮气15min，然后加入30mg引发剂，密封，控制水浴温度为60℃、转速为200rpm，振荡12h，再采用外加磁场对进行磁吸附分离，将分离出的沉淀物质冷却至室温，采用洗脱液进行反复洗涤，至高效液相色谱/质谱检测不到上清液中有模板分子残留后，再分离出沉淀物，在真空干燥条件下，烘干，得到三嗪类农药磁性分子印迹聚合物；

三、将10mg步骤二得到的三嗪类农药磁性分子印迹聚合物加入0.5mL5-（4,6-二氯三嗪基）氨基荧光素乙醇溶液中，再与0.25mL三嗪类农药阿特拉津标准品的乙醇溶液混合，在室温条件下振荡孵育1h，再采用磁力架吸附30s，然后吸取100mL上清液，再用3mL乙醇稀释，然后采用荧光分光光度计测定荧光信号，控制激发波长为336nm，并于515nm的检测荧光发射波长，完成磁性分子印迹聚合物-荧光分析方法。

本发明步骤一中控制Fe³⁺和Fe²⁺的物质的量比为0.6∶1最佳。

本发明是利用三嗪类农药和荧光材料二者对三嗪磁性分子印迹聚合物的竞争反应，实现对三嗪类农药的快速检测。