[发明专利]一种利用电泳检测PCR产物的方法

说明书

技术领域

    本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种利用电泳检测PCR产物的方法。

背景技术

    聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。由于糖—磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量碱基的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应：在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型，具有不同分子量的DNA片段迁移速度不一样，迁移速度与DNA分子量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同分子量的DNA，也可以分离分子量相同、但构型不同的DNA分子。例如，一般提取的质粒有3种构型：超螺旋的共价闭合环状DNA(covalentlyclosedcircularDNA，简称cccDNA)，开环DNA，即共价闭合环状质粒DNA有一条链断裂，(opencircularDNA，简称ocDNA)，线状质粒DNA，即质粒DNA在同一处两条链都发生断裂(linearDNA，简称LDNA)。由于这3种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的迁移率不同，因此通常抽提的质粒在电泳后往往出现3条带，其中超螺旋质粒DNA泳动最快，其次为线状DNA，最慢的为开环质粒DNA。溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5ng以上的DNA。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用电泳检测PCR产物的方法，以检测PCR产物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种利用电泳检测PCR产物的方法，其特征包括以下步骤：

A．配制1×电泳缓冲液，导入电泳槽；

B．洗刷干净制胶板，插好制胶孔的梳子；

C． 称量：根据你要得到的靶基因片段的大小确定琼脂糖凝胶的浓度；

D． 溶解：用电泳缓冲液溶解琼脂糖，放在微波炉里加热，帮助溶解，尽量注意避免沸腾；

E．从微波炉里拿出三角瓶，待冷却至约60℃时加入荧光DNA染料，摇匀后把熔胶液倒入制胶板，等待凝固；

F．凝固后，拔掉梳子；

G．把凝胶放进电泳槽中；

H．加样；

I．插上电源，电泳。

所述步骤D的琼脂糖为1%。

所述步骤I的电泳为200v，250mA。

本发明的有益效果：本发明采用电泳的方法可方便快捷的检测PCR产物。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例：

一种利用电泳检测PCR产物的方法，其特征包括以下步骤：

A．配制1×电泳缓冲液，导入电泳槽；

B．洗刷干净制胶板，插好制胶孔的梳子；

C． 称量：根据你要得到的靶基因片段的大小确定琼脂糖凝胶的浓度；

D． 溶解：用电泳缓冲液溶解琼脂糖，放在微波炉里加热，帮助溶解，尽量注意避免沸腾；

E．从微波炉里拿出三角瓶，待冷却至约60℃时加入荧光DNA染料，摇匀后把熔胶液倒入制胶板，等待凝固；

F．凝固后，拔掉梳子；

G．把凝胶放进电泳槽中；

H．加样；

I．插上电源，电泳。