[发明专利]一种修复土壤生态系统的微生物修复剂

说明书

技术领域

本发明属于土壤生态系统修复领域，特别是一种用于土壤生态系统修复的微生物土壤修复剂及其制备方法，以及该微生物土壤修复剂在修复土壤中的应用。

背景技术

随着工农业发展，土壤资源承受了越来越大的压力，由于大量化肥、农药的使用及重金属污染，放射性污染使得土壤中难降解的有机物日益增多，从而导致土壤微生物种类和数量减少、土壤结构及生态系统破坏、农作物品质下降、病虫害增加，土壤生态系统被破坏。

发明内容

本发明的目的在于提供一种修复土壤生态系统的微生物修复剂；

本发明另一目的是提供一种制备修复土壤生态系统的微生物修复剂的方法；本发明再一目的是将上述的微生物修复剂应用于土壤修复，促进作物生长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的，一种修复土壤生态系统的微生物修复剂，其特征在于，以巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、丁酸梭菌和酵母菌作为主体菌，以乳酸菌、细黄链霉菌作为辅助菌，将发酵完成的各菌种按照以下活菌数比例混合均匀得到液体微生物修复剂，巨大芽孢杆菌50-60，地衣芽孢杆菌40-50，丁酸梭菌30-50，酵母菌20-50，乳酸菌1-2，细黄链霉菌1，混合菌液中的有效活菌数≥3亿/毫升。

进一步地，所述液体微生物修复剂与固体吸附物按照1升：5～10千克的体积重量比混合均匀后即得固体微生物修复剂。

进一步地，所述固体吸附物为草炭土和蛭石的混和物，经粉碎、高温消毒后制得。

进一步地，所述主体菌的有效活菌数≥3亿/毫升；所述辅助菌的有效活菌数≥1000万/毫升。

一种制备上述修复土壤生态系统的微生物修复剂的方法，包括以下步骤：

（1）分别用固体培养基复苏巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和细黄链霉菌，并挑选出单克隆菌落；

（2）将挑选出的巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和细黄链霉菌的单克隆菌落分别接种在一级液体培养基中，获得液体菌种；

（3）分别将巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和细黄链霉菌的液体菌种在二级培养培养基中，放大培养；

（4）分别将巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和细黄链霉菌经放大培养的菌液接种到发酵罐中发酵培养，得到生产用菌液；

（5）将生产用菌液按照活菌数比例配比，混合均匀得到液体微生物修复剂；

（6）草炭土和蛭石粉碎，经高温灭菌，冷却至室温后，将上述液体微生物修复剂喷洒在其上，充分吸收混合均匀后即得到固体微生物修复菌剂。

上述修复土壤生态系统的微生物修复剂在修复土壤中的应用，包括用于作物种植前基施或/和作物种植后追施。

上述微生物修复剂中各种微生物发酵液均可以按照常规方法制备，将购买到的菌种接种到固体培养基上进行复苏培养，菌体生长后，挑取单克隆；将单克隆接种到小量液体培养基中培养（一级培养），得到液体菌种；将液体菌种接种到中量液体培养基中进行放大培养（二级培养）；放大培养后的菌种在接种到发酵罐中发酵培养，最终得到所要菌种的液体菌剂。对于该发明中涉及到的微生物，可以参考以下的方法制备：

下述的各种配方均为菌体液体培养基配方，固体培养基是在一级液体培养基的基础上加入2%琼脂。具体就是在一级液体培养基中加入2%的琼脂，加热至100℃溶解，40℃下冷却并凝固，使其成为固体状态即为固体培养基。所有的培养基均在120oC高温高压灭菌处理30分钟。

（一）巨大芽孢杆菌 （Bacillus megaterium，ATCC 14581，ATCC编号为美国典型培养物保藏中心编号）：

（1）复苏活化、挑取单克隆：将购买的菌种接种到固体培养上，37℃静置培养24小时。固体培养的配方是琼脂2%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.2%，葡萄糖0.5%，用蒸馏水溶解，用水补足至100%，调节pH值为7.0。将上述混合物，在120℃高温高压灭菌处理30分钟，40℃下冷却并凝固。

（2）一级培养，得到液体菌种：将单克隆菌落接种到一级液体培养基中，37℃摇床培养，转速为200转/分钟，过夜培养后得到液体菌种。其中一级液体培养基配方为牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.2%，葡萄糖0.5%，用蒸馏水溶解，用水补足至100%，调节pH值为7.0。培养基在120oC高温高压灭菌处理30分钟。