[发明专利]一种基于CRISPR基因敲除技术建立脆性X综合症灵长类动物模型的方法

权利要求书

1.一种基于CRISPR基因敲除技术建立脆性X综合症灵长类动物模型的方法，其特征是，包括以下步骤：

(1) 建立FMR1基因敲除食蟹猴模型；

(2) 食蟹猴动物模型的鉴定及相关功能分析；

(3) 食蟹猴动物模型的神经特征和学习记忆能力测试。

2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR基因敲除技术建立脆性X综合症灵长类动物模型的方法，其特征是，所述建立FMR1基因敲除食蟹猴模型，具体包括以下步骤：

1）CRISPR靶向修饰基因载体的构建；

2）食蟹猴促排卵和体外受精；

3）食蟹猴受精卵的显微注射；

4）受精卵体外培养、植入受体及靶向基因修饰动物的培育。

3.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR基因敲除技术建立脆性X综合症灵长类动物模型的方法，其特征是，所述食蟹猴动物模型的鉴定及相关功能分析，具体包括以下步骤：

1）对CRISPR靶向位点进行DNA测序鉴定食蟹猴动物模型的基因型；

2）利用实时定量PCR（real-time PCR）检测食蟹猴细胞中FMR1基因mRNA水平的降低；

3）通过免疫荧光染色检测食蟹猴细胞中FMRP蛋白的缺失；

4）观察食蟹猴心脏、肝、脾脏、肾脏、肌肉等重要器官或组织是否发生病变；

5）观察食蟹猴是否有FXS所特有的大睾丸症。

4.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR基因敲除技术建立脆性X综合症灵长类动物模型的方法，其特征是，所述食蟹猴动物模型的神经特征和学习记忆能力测试，具体包括以下步骤：

1）利用电生理实验检测海马CA1的外势场（extracellular field potential）变化，从而验证由DHPG诱导的mGluR-LTD的变化；

 2）研究食蟹猴的探索行为。