[发明专利]猪支原体肺炎疫苗株

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪支原体肺炎疫苗株，属于兽用生物制品领域。

技术背景

猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）是引起猪支原体肺炎（Mycoplasmal pneumoniae of swine，Mps又称猪气喘病）的主要病原，也是猪呼吸道疾病综合症的一种重要的原发性病原。Mhp主要感染猪呼吸道，本身致病力不强，临床症状主要以咳嗽和气喘为主，病变特征主要是肺的尖叶、心叶、中间叶和隔叶前缘呈“肉样”或“虾肉样”实变。Mhp感染机体后主要与呼吸道内壁的纤毛黏附，引起纤毛细胞病变和凋亡，导致纤毛断裂和脱落，引起机体发病，并且会严重影响猪的生长发育和饲料转化率，或者破坏粘膜-纤毛屏障，容易继发其他致病菌的感染（特别是对青年猪），提高致死率，因而给养猪业造成巨大的经济损失。目前猪支原体肺炎的主要防治措施是疫苗和药物，但有效的药物较缺乏，因此，进行该病的疫苗研制将为本病的预防和控制具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种猪支原体肺炎疫苗株，该疫苗株对猪有一定的致病性，培养滴度高且具有良好的免疫原性。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一株猪支原体肺炎疫苗株，其分类命名为猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae），菌株号为NJ，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC NO:M2012286，保藏日期：2012年7月16日。该菌株是发明人于2004年8月于南京某猪场自行采集筛选鉴定获得一株猪支原体肺炎疫苗株。

有益效果：本发明具有下列突出的优点：

1）新菌株免疫原性好：本发明的猪支原体肺炎疫苗株为从国内分离培养选育的新菌株，具有良好的免疫原型，保证了疫苗的特异性和免疫效力。

2）新菌株生产疫苗简便：本发明的猪支原体肺炎疫苗株为经过培育的地方分离菌株，具有高滴度的培养特性，保证了制苗用抗原的高滴度，减少了浓缩步骤；同时该菌株可用硫柳汞灭活，硫柳汞本身是一种防腐剂，用其来灭活兼顾了灭活和防腐，减少了用量，减少了对动物的不良反应；由于本发明的菌株具有良好的免疫原性，使的制备的灭活疫苗中免疫佐剂成分简单，制苗方法简便，简化了生产工艺，降低了生产污染的风险。

3）新菌株生产的疫苗安全高效：本发明的猪支原体肺炎疫苗株为经培育的地方分离株，具有培养滴度高、免疫原性好的特点，使用的佐剂为经过筛选获得的油佐剂具有良好的免疫保护性，水性佐剂具有具有良好的安全性，保证了疫苗的安全和高效。

总之，本发明的灭活疫苗生产简便、疫苗安全高效，能较好的满足目前猪场的迫切需要，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

附图说明

图1猪支原体肺炎灭活疫苗（NJ株）制备流程图。

图2猪肺炎支原体NJ株与其他菌株16s rRNA基因相似度比较。

图3猪肺炎支原体NJ株与其他菌株16s rRNA基因进化树。

图4猪肺炎支原体NJ株与其他菌株P46基因相似度比较。

图5猪肺炎支原体NJ株与其他菌株P46基因进化树。

具体实施方式

下面的实施例将进一步说明本发明，而不限制本发明的范围。

实施例1：猪肺炎支原体NJ株的选育

1菌株分离培养

将病肺组织进行研磨后，加入液体培养基（pH值7.4～7.6）中，置37℃培养3～10日后pH值降为6.6～7.0，轻度均一混浊。再接种固体培养基置37℃培养3～10日后，可见油煎蛋样菌落，在固体培养基上传代3次后，接种液体培养基，获得猪肺炎支原体。

2鉴定

将分离的猪肺炎支原体株置37℃培养3～10日后pH值降为6.6～7.0，轻度均一混浊，进行涂片，染色镜检见典型的猪肺炎支原体菌体。再接种固体培养基置37℃培养3～10日后，可见油煎蛋样菌落。符合猪肺炎支原体的培养特性。

根据Genbank报道的猪肺炎支原体16s rRNA和P46基因序列分别设计引物，PCR扩增后，测序，测定的序列与已公布的全基因组序列进行ClustalW比对。