[发明专利]甜叶菊种质保存方法

说明书

技术领域

本发明是关于植物种质的保存方法，更具体地说，是一种利用组织培养技术延长甜叶菊种质保存时间的方法。

背景技术

甜叶菊是菊科草本植物，原产巴拉圭一带，八十年代初我国引种栽培成功，其叶片中甜菊糖苷的甜度是蔗糖300倍以上，被称为是最有开发价值和前途的健康新糖源。甜叶菊为异花授粉植物，种子带浮毛、易带菌，加上种子体积小、活力低等缺点，用常规的育种方法进行种质保存，种子的发芽率很低且易产生混杂。采用常规组培瓶接种进行甜叶菊苗种质保存，在（25±2）℃，1500lx光照12h/d的常规条件下培养，种苗的生长空间较大，生长较快，保存1-2个月种苗就长满组培瓶，需继代后再培养保存。而本发明技术方案将种苗接种到试管中，在10-15℃，100-200lx光照12h/d的培养条件下，限定种苗的生长空间和培养条件，种苗生长较缓慢，培养保存10-12个月才能长满试管空间再进行继代培养保存。此方法可减少保存种苗继代培养的次数，节省继代培养所需培养基原料成本、劳力和培养保存空间。目前，关于甜叶菊种质保存的方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的是克服常规种质保存方法的不足，提供一种长时间保存甜叶菊种质方法的技术，节省甜叶菊种质保存所需成本、劳力和空间。

本发明是这样实现的：

一种甜叶菊种质保存方法包括以下技术环节：

①外植体消毒：将甜叶菊种质的种苗用自来水冲洗5-8 min，洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升汞中处理10 min，消毒后用无菌水冲洗3-4次；

②接种：在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5 cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的试管中，每个试管接种2个茎段；

③培养基配方：MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30 g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L；

④培养条件：将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度5-15℃，光照强度50-1000 lx，光照时间12h/d。

⑤继代培养保存：培养保存一段时间后，种苗长满至试管顶部，无继续生长空间，需进行继代接种培养保存。

所述培养箱培养中培养温度最好为10-15℃，所述培养箱光照强度最好为100-200 lx。

本发明的有益效果：

本发明通过对接种容器的选择和组织培养条件的控制，有效地延缓甜叶菊种苗的生长速度，延长了种质培养保存的时间，减少了保存继代的次数；同时，也节省了继代保存所需培养基成本、劳力和培养空间。

附图说明

图 1 为常规组培条件下甜叶菊种质生长1个月的示意图；

图 2 为10℃、100lx光照条件下试管中甜叶菊种质生长6个月的示意图；

图 3 为10℃、100lx光照条件下试管中甜叶菊种质生长12个月的示意图。

具体实施方式

具体实施方式举例1，甜叶菊品种B1种质的组培保存

①外植体消毒：将甜叶菊品系B1种苗用自来水冲洗5-8 min，洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升汞中处理10 min，消毒后用无菌水冲洗3-4次；

②接种：在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5 cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的100 ml试管中，每个试管接种2个茎段；

③培养基配方：MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30 g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L；

④培养条件：将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度10℃，光照强度100lx，光照时间12h/d；

 ⑤继代培养保存：培养保存12个月后，种苗长满至试管顶部，需进行继代接种培养保存。

具体实施方式举例2，甜叶菊品种B6种质的组培保存

①外植体消毒：将甜叶菊品系W3种苗用自来水冲洗5-8 min，洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升汞中处理10 min，消毒后用无菌水冲洗3-4次；

②接种：在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5 cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的100 ml试管中，每个试管接种2个茎段；