[发明专利]抗Lp(a)单克隆抗体及Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞株以及分泌的单克隆抗体，尤其涉及一种抗脂蛋白(a)[Lipoprtein(a),Lp(a)]的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，本发明进一步Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒，属于脂蛋白(a)的检测领域。 

背景技术

脂蛋白(a)［Lipoprotein(a)，Lp(a)］是人体内一种独特的脂蛋白，由低密度脂蛋白(LDL)样微粒和载脂蛋白(a)［apolipoprotein(a)，apo(a)］组成。Apo(a)与纤溶酶原的基因高度同源，属于人类纤溶酶原基因超家族成员。Apo(a)由多拷贝的纤溶酶原Kringle IV样的重复片断和单拷贝的Kringle V和丝氨酸蛋白酶区域构成。Apo(a)有10种纤溶酶原Kringle IV样的基序(命名为Kringle IV-1～Kringle IV-10)，除了Kringle IV-2外，每种Kringle IV都是单拷贝。Apo(a)多态性受基因控制，不同apo(a)亚型Kringle IV-2的拷贝数为3-40不等。关于Lp(a)的最大的流行病学研究已证明Lp(a)水平与心脏疾病和缺血性脑卒中存在连续的独立的中等程度的相关，高Lp(a)作为心脑血管动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素已得到公认。 

Lp(a)浓度检测常用的方法有双抗体夹心ELISA法、免疫比浊法与胶乳增强免疫比浊法。这三种方法均需要用到Lp(a)抗体，其中后两种方法在临床检验上应用更多，特别是胶乳增强免疫比浊法。由于Lp(a)分子量大，结构复杂，目前还无法通过人工表达手段制备Lp(a)抗原。多克隆抗体（多抗）制备用Lp(a)抗原只能从血清中纯化制备，由于Lp(a)在不同人之间具有多态性，受血清来源的限制，Lp(a)抗原的批间差较难控制，最终导致Lp(a)多抗的批间差较大。另外，由于apo(a)分子Kringle IV-2拷贝数的差异，用针对该位点的单抗或多抗作为原料制备的试剂盒会受到抗原多态性的影响，造成检测结果的不准确。 

多克隆抗体（多抗）制备用Lp(a)抗原只能从血清中纯化制备，由于Lp(a)在不同人之间具有多态性，受血清来源的限制，Lp(a)抗原的批间差较难控制，最终导致Lp(a)多抗的批间差较大。单克隆抗体（单抗）虽然不依赖Lp(a)抗原，但现有单抗要么识别多态性位点，要么需要与其他单抗进行配对使用。以胶乳增强免疫比浊试剂为例：试剂配制中，抗体种类的增加会相应的偶联工序与浓度调整工序，工作量成倍增长，试剂盒性能差异变大的风险也会由此产生。 

开发识别apo(a)分子Kringle IV-2以外抗原表位的单克隆抗体，可以很好解决抗体批间差大与apo(a)多态性影响的问题。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一株能生产自身配对，特异性结合Lp(a)，且能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株； 

本发明的目的之二是提供由所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体； 

本发明的进一步目的是将该单克隆抗体应用于检测Lp(a)并提供一种Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒。 

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的： 

本发明人用Lp(a)分子中的多态性片段Kringle IV-2为筛选抗原，采用间接ELISA法进行Lp(a)特异性单克隆抗体筛选，用棋盘法进行单抗的配对筛选，最终获得了1株能够产生自身配对、特异性结合Lp(a)、且与Kringle IV-2无结合的单抗目标细胞株，从而完成了本发明。 

本发明首先提供一株产生能自身配对、特异性结合Lp(a)且与Kringle IV-2无结合的抗Lp(a)单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 

本发明将所筛选得到的杂交瘤细胞株将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.8509；分类命名为：脂蛋白（a）单克隆抗体杂交瘤细胞株；保藏日期：2013年11月20日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。 

本发明还提供了一种制备所述的杂交瘤细胞株的方法，包括：用Lp(a)分子中的多态性片段Kringle IV-2为筛选抗原，采用间接ELISA法和双抗夹心ELISA法进行Lp(a)特异性单克隆抗体筛选的工序，筛选得到所述杂交瘤细胞株。 

本发明中的杂交瘤细胞株与抗Lp(a)单克隆抗体可以通过下文所述的方法产生。进一步，本领域的技术人员可以使用这些根据下文描述及本领域中已知技术改造过的更适合的方法。