[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保护性抗原决定子的鉴定及其用途

说明书

本申请是申请日为2006年11月29日的申请号为200680044869.X标题为“猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保护性抗原决定子的鉴定及其用途”的申请的分案申请

交叉申请

本申请根据35U.S.C.§119要求2005-11-29提交的临时申请60/740,519的优先权，该申请全文包含在本文中作为参考。

技术领域

本发明的实施方案总体涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，更具体涉及PRRSV的新保护性抗原决定子（PAD）的发现，以及其在疫苗、治疗和诊断分析中的应用。

背景技术

1987年中,美国猪生产业经历了一种未知的感染性疾病，对养猪业造成了严重的经济影响。该疾病综合征在欧洲包括德国、比利时、荷兰、西班牙和英格兰都有报道。

该疾病的特征在于繁殖不能，呼吸疾病和各种临床症状包括丧失胃口，发热，腹泻以及轻微的神经症状。该综合征的主要组成部分是繁殖不能，表现为早产，晚期流产，先天体弱，死产，木乃伊胎，产崽率降低，以及动情期恢复延迟。临床呼吸疾病症状在3周龄以下的猪中最为明显，并据报道出现于所有生产期。受累幼猪生长缓慢，皮毛粗糙，呼吸窘迫（“喘粗气”），并且死亡率增加。

该疾病综合征由很多名称，包括猪神秘病(mystery swine disease)(MSD),猪流行性流产(porcine epidemic abortion)以及呼吸综合征(respiratory syndrome)(PEARS),猪不孕与呼吸综合征(swine infertility and respiratory syndrome)(SIRS)。现在通常使用的名称是猪繁殖与呼吸综合征(PRRS);该术语在本专利申请中通篇使用。

PRRSV优选在肺泡肺巨噬细胞中生长(Wensvoort et al.,1991)。一些细胞系，诸如CL2621以及其他从猴肾细胞系MA-104克隆的其他细胞系也对病毒敏感。一些已知的PRRSV毒株的保藏号为CNCM I-1102,I-1140,I-1387,I-1388,ECACC V93070108,或ATCC VR2332,VR2385,VR2386,VR2429,VR2474,和VR2402。PRRSV基因组长度为15kb，包含编码RNA依赖性RNA聚合酶的基因(ORF1a和ORF1b)以及编码结构蛋白的基因(ORFs2-7;Meulenberg et al.,1993and Meulenberg et al.,1996)。ORF5编码主要包膜糖蛋白，称为GP5。ORFs2,3和4分别编码糖蛋白GP2,GP3和GP4。这些糖蛋白在PRRSV的Lelystad病毒分离株的纯化病毒粒子中以较低的丰度存在。GP5蛋白长度大约200个氨基酸，分子量25kDa，并与ER中的ORF6编码的基质蛋白M形成二硫键连接的异源二聚体。M蛋白长度大约190氨基酸，19kDa，并且是非糖基化。核壳体蛋白N由ORF7编码。来自欧洲和北美的PRRSV分离株的基因组序列的分析，以及其与单克隆抗体的反应性已经证实了它们代表两种不同的抗原类型。这些洲的分离株在遗传上不同并且从共同祖先在较早以前分离(Murtaugh et al.,1995)。

动脉炎病毒（arteriviruses）的基因组组成类似冠状病毒和托罗病毒，它们的复制涉及亚基因组mRNA的3’-共末端嵌套组的形成mRNAs(sg mRNAs)(Chen et al.,1993,J.Gen.Virol.74:643-660;Den Boon et al.,1990,J.Virol.,65:2910-2920;De Vries et al.,1990,Nucleic Acids Res.,18:3241-3247;Kuo et al.,1991,J.Virol.,65:5118-5123;Kuo et al.,1992;U.S.application Ser.Nos.08/131,625and08/301,435)。几种北美分离株的部分序列也被测定(美国申请08/131,625和08/301,435;Mardassi et al.,1994,J.Gen.Virol.,75:681-685)。目前可得的疫苗不诱导病毒中和型VN抗体或诱导的抗体水平不适合对抗PRRSV感染。目前没有商业可得的含有预防PRRSV感染或治疗PRRS的抗体的产品。目前商业可得的疫苗不提供对抗PRRS的适当保护。保守估计表明PRRS造成每年美国工业花费$60亿。