[发明专利]一种胚胎组织固定剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药材料领域，具体涉及一种胚胎组织固定剂及其制备方法和应用。

背景技术

病理标本的制作和组织切片需要先进行固定。固定效果不好，HE染色、免疫组化、原位杂交就难以进行，因此，组织固定是形态学研究中不可缺少的重要步骤。现有的组织固定剂有醛类固定剂（福尔马林、多聚甲醛、戊二醛等）、沉淀脱水类固定剂（甲醇、乙醇、丙酮等）、酸类固定剂（铬酸、丹宁酸、冰醋酸等）、Bouin固定剂、Zenker氏固定剂、Carrnoy氏固定剂。

胚胎组织具有其特定的结构和形态，比如胚胎内部含较多膜性组织，内部膜性组织含有较多磷脂多糖成分，现有的固定剂固定胚胎组织时，会出现各种劣势和缺点。比如：酸类固定剂中的铬酸、丹宁酸单独使用时渗透比较缓慢，对于离体胚胎组织不能起到快速定型固定的效果；沉淀脱水类固定剂有使材料收缩的作用，易导致组织变形，切片时硬度太高，容易发生空泡现象等缺点，易导致切片出现假阳性结果，故不适于需要做胚胎组织的固定剂。

因此，有必要提供一种胚胎组织固定剂及其制备方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种胚胎组织固定剂，该胚胎组织固定剂采用复合配方，含有2，4，6-三硝基苯酚、甲醛、铬酸和乙酸，该胚胎组织固定剂对膜性结构有快速渗透作用，能快速渗透定型，可兼顾胚胎组织核酸、蛋白的保护以及组织形态上的保存；该胚胎组织固定剂还可使胚胎组织保持适当的硬度，易获得完整连续的切片，避免空泡现象，从而能对胚胎发育过程中的组织形态进行有效的观察，降低出现假阳性结果的概率。本发明还提供了一种胚胎组织固定剂的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种胚胎组织固定剂，该胚胎组织固定剂含有2，4，6-三硝基苯酚、甲醛、铬酸和乙酸；

所述胚胎组织固定剂各组分的重量百分比为：

2，4，6-三硝基苯酚  0.67%～0.79%；

甲醛  11%～15.4%；

铬酸  0.38%～0.58%；

乙酸  4.2%～6.8%；

余量为水。

优选地，所述胚胎组织固定剂各组分的重量百分比为：

2，4，6-三硝基苯酚  0.73%；

甲醛  13.2%；

铬酸  0.48%；

乙酸  5.1%；

余量为水。

优选地，所述固定剂各组分的体积百分比为：

饱和2，4，6-三硝基苯酚溶液（质量分数为1.2%）  60%；

甲醛（体积分数40%）  30%；

饱和铬酸溶液（质量分数为12%）  5%；

乙酸（100%）  5%；

具体地，实际应用中本发明提供的胚胎组织固定剂的配方不限于本发明所述乙酸，根据需要，其他弱有机酸、或者其他弱有机酸与乙酸中的至少一种可以作为本发明采用的乙酸的替代。

胚胎含有较多膜性组织，其内部膜性组织含有较多磷脂多糖成分，本发明提供的固定剂采用符合配方，能快速均匀地渗透胚胎内部膜性组织，并减少空泡现象的出现，从而很好的保存标本原始状态，并获得完整的病理性组织切片。

此外，本发明提供的胚胎组织固定剂降低了固定过程中对蛋白质抗原表位的覆盖或破坏作用，对于蛋白有较高的保护效率，不影响切片用于做免疫组化病理实验。

本固定剂采用本发明提供的固定剂制备得到的切片经过一定的步骤处理后，能够用于RT-PCR、原位杂交、免疫组化、免疫荧光等分子病理学实验。

本发明提供的胚胎组织固定剂中的铬酸是蛋白质的良好固定剂，还可帮助保存糖类，但其渗透力较低，而胚胎组织固定剂中的乙酸渗透性强，提高了固定剂对胚胎组织的固定渗透效果。

苦味酸（即2，4，6-三硝基苯酚）可使蛋白质、核酸等沉淀，并防止过度硬化，能提高后续染色过程中组织的着色能力，但是苦味酸在组织中的渗透缓慢，且会使组织强烈收缩；此外，苦味酸本身为黄色，会给固定后的组织染上一定的背景色，影响后续胚胎免疫组化和苏木素-伊红染色（HE染色）等涉及颜色观察的实验。采用本发明提供的苦味酸浓度，配合其他组分，可以在保证苦味酸的功效的前提下，降低固定后胚胎的背景色，有利于实验结果的观察。