[发明专利]一种Aβ斑块显像剂前体AV45的含量分析方法

说明书

技术领域

一种Aβ斑块显像剂前体AV45的含量分析方法，属于仪器分析技术领域。

背景技术

随着社会进入老龄化，我国老年人口越来越多，阿尔茨海默病(AD)的发病率逐年上升，目前中国AD患者约有500万人之多，已经成为威胁晚年生活质量的主要疾病之一，给社会及家庭带来巨大的经济负担，未来的中国社会将为此承受巨大的压力和挑战。如何有效防治AD疾病、提高晚年生活质量是科研工作者面对的极为迫切的一项重大课题。目前，AD的发病机制尚不十分明了，β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ) 聚集被认为是AD的主要病理特征。临床表现为认知功能障碍和记忆力衰退，进而致社交障碍，生活自理能力丧失，并有各种神经精神症状和行为障碍。早期检测Aβ斑块聚集，并进行抗Aβ斑块疗效监测，是防治AD的有效措施。

随着分子影像学发展，利用单光子发射计算机断层成像技术（SPECT）或正电子发射断层扫描仪（PET），采用特殊的显像剂与脑组织内的Aβ斑块特异性结合，直观地显示脑内Aβ斑块分布情况，是目前早期诊断AD的国际最先进的分子影像技术。因此，研制特异的Aβ斑块显像剂对于AD的早期诊断及疗效评价具有重要意义。

¹⁸F-AV45是由美国Avid 公司研制的具有良好临床应用价值的正电子发射断层(PET)显像试剂，目前已被FDA批准用于临床。¹⁸F-AV45对Aβ斑块具有较好的亲和力，能够特异性结合Aβ斑块，在AD患者皮质层具有显著滞留，PET显像可以显著区别AD患者和认知健康的志愿者。一系列临床前及临床研究表明¹⁸F-AV45能够在体鉴别AD病人脑中Aβ斑块病理状态，目前已用于人体内淀粉样蛋白沉积过程的可视化及定量研究，即将走向临床。

¹⁸F-AV45（化合物3）是由标记前体(E)-2-(2-(2-(2-对甲苯磺酰氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-5-(4-叔丁氧羰基甲基氨基苯乙烯)吡啶（化合物1）经¹⁸F标记制备而成。

要获得放化纯较高的PET显像剂¹⁸F-AV45，除了控制标记条件外，另一个关键之处是在合成标记前体中严格控制前体杂质的含量，包括AV45反应中间体（化合物2，以下简称中间体）的含量，获得高纯度的标记前体AV45。

文献报道的HPLC法采用乙腈:醋酸胺(85:15)为流动相，峰型存在拖尾现象，峰较宽，不能将杂质有效地分离。本法采用磷酸盐作缓冲剂，并采用添加三乙胺使拖尾现象得到了改善，峰对称性较好。与文献方法相比，理论塔板数和分离度有了很大的提高，各杂质分离较好。采用325nm检测使各杂质能有效加以检测。

发明内容

本发明的目的是建立高效液相色谱法测定Aβ斑块显像剂前体AV45的含量及有关物质的含量，为药盒的质量控制提供有效的分析手段，为临床用药提供质量控制依据，相关研究未见报道。

本发明的技术方案：一种Aβ斑块显像剂前体AV45的含量分析方法，色谱条件：仪器：WATERS 600型高效液相色谱仪，2487紫外检测器，色谱柱Inertsil C18柱，5μm，4.6×250mm；流动相：50mM磷酸氢二钠︰乙腈体积比=15︰85，加三乙胺v/v 0.01%，使用前经0.45μm有机滤膜抽滤并脱气；流速：0.8mL/min；AV45样品的进样体积：10μL；柱温：室温；检测波长：325nm。

本发明的有益效果：本法采用磷酸盐作缓冲剂，并采用添加三乙胺使拖尾现象得到了改善，峰对称性较好。与文献方法相比，理论塔板数和分离度有了很大的提高，各杂质分离较好。采用325nm检测使各杂质能有效加以检测。

附图说明

图1流动相乙腈:醋酸铵体系 (85:15)，1、前体AV45的HPLC色谱图（图1-b），2、中间体 HPLC色谱图（图1-a）；

图2 磷酸氢二钾体系中间体 HPLC色谱图，a：乙腈:25mM磷酸氢二钾(85:15)，b：乙腈:25mM磷酸氢二钾(85:15)含0.01%三乙胺；

图3 25mM磷酸氢二钠体系中间体 HPLC色谱图，a：乙腈:25mM磷酸氢二钠(85:15)，b：乙腈:25mM磷酸氢二钠(85:15)含0.01%三乙胺；

图4 流动相乙腈:50mM磷酸二氢钠体系 (85:15)含0.01%三乙胺，1、前体AV45 的HPLC色谱图（图4-b），2、中间体 HPLC色谱图（图4-a）；