[发明专利]一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法

权利要求书

1.一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）川贝母多倍体愈伤组织的诱导培养：选取川贝母新鲜鳞茎的鳞片叶，先进行消毒处理，然后接入pH值为5.5～6.2的MS+6-BA0.1～1.0mg·L^-1+2，4-D1.0～5.0mg·L^-1+IAA0.1～1.0mg·L^-1+秋水仙素300～600mg·L^-1+蔗糖20～40g/L+琼脂5.0～6.5g/L的培养基中，在温度为12～20℃且无光照的条件下诱导培养2～5天，然后再转接到不含秋水仙素的上述培养基中，在同样的培养条件下进行培养，获得川贝母多倍体愈伤组织；

（2）川贝母多倍体愈伤组织的预处理：在超净工作台上将川贝母多倍体愈伤组织从培养瓶中取出，直接浸泡于装有柠檬酸溶液的培养皿中，并在柠檬酸溶液中将其切割为1.0cm～3.0cm³的大小后，转接入pH值为5.0的MS+活性炭1.0～4.0%+乳糖20～35g/L的液体培养基中，在温度为10～15℃、无光照和摇床转速为120～140r/min的条件下预处理4～8天；

（3）川贝母多倍体愈伤组织的增殖培养：将经预处理后的川贝母多倍体愈伤组织转接到pH值为5.5的改良MS+2,4-D1.0～4.0mg/L+KT0.5～2.0mg/L+二硫苏糖醇0.1～0.3mg/L+葡萄糖20～45g/L+琼脂4.0～5.0g/L的固体培养基中，在培养温度为12～26℃、每天光照4～8小时和光照强度为500～800lx的条件下进行增殖培养，所述改良MS基本培养基为无机物和硝酸钾含量减半的MS基本培养基。

2.根据权利要求1所述的一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法，其特征在于：步骤（1）中所述消毒处理是指先用洗衣粉洗净后于流水下冲洗25～30mim，再用2.0%次氯酸钠溶液漂洗12～15min，用清水洗净并吸干水后，再放入0.1%升汞溶液中消毒7～10mim，然后用无菌水冲洗2～3次后用无菌滤纸吸干表面的水分。

3.根据权利要求1所述的一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法，其特征在于：步骤（2）中所述柠檬酸溶液的浓度为0.1～0.5mg/L。