[发明专利]一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法

权利要求书

1.一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，包括川贝母组培鳞茎的诱导培养步骤，其特征在于还包括如下步骤：

川贝母多倍体不定根的获得：将川贝母组培鳞茎先接种于1/2MS+IBA0.1～0.3mg·L^-1+秋水仙素200～700mg·L^-1的培养基中，在无光照和温度为12～18℃的条件下培养2～5天，再转入不含秋水仙素的上述培养基中，在培养温度为18～24℃、每天光照4～8h和光照强度为800～1200lx的条件下继续培养，在川贝母鳞茎的基部有形状粗大的多倍体不定根产生；

多倍体不定根的预处理：将多倍体不定根从根基部切下后接入MS+6-BA0.1～0.5mg·L^-1+甘油100～200ml·L^-1的培养基中,在无光照和培养温度为35～40℃的条件下进行15～25天的预培养处理；

多倍体不定根生长点区域细胞的培养：在超净工作台上，切取多倍体不定根上生长点区域的细胞，将其接入愈伤组织诱导培养基B5+6-BA0.5～2.0mg.L^-1+2,4-D0.5～4.0mg.L^-1中，在培养温度为15～22℃、每天光照5～8小时、光照强度为400～1000lx的条件下培养40～60天，获得多倍体愈伤组织；

川贝母多倍体鳞茎芽的诱导：选取质地较紧密、生长速度快且颜色为黄白色或淡黄色的多倍体愈伤组织，将其接入多倍体鳞茎芽诱导培养基MS+6-BA1.0～4.0mg·L^-1+IAA0.1～0.3mg·L^-1中，在培养温度为18～22℃、每天光照12～20h、光照强度为1000～3000lx的条件下培养45～60天，获得川贝母多倍体鳞茎芽；

多倍体鳞茎芽的生根培养：在超净台上切取生长1.0～3.0cm的多倍体鳞茎芽作为无根苗，将其转入生根培养基1/2MS+NAA0.1～0.3mg·L^-1+IBA0.1～0.3mg·L^-1中诱导生根，获得川贝母多倍体脱毒苗；

炼苗和移栽：选取长出2条以上不定根的川贝母多倍体脱毒苗，打开瓶盖，在室内炼苗3～5天后，将其从培养瓶中取出，洗去不定根上的培养基后，移栽至消毒后的松软土壤中生长。

2.根据权利要求1所述的一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，其特征在于所述川贝母组培鳞茎的诱导培养步骤是：选取生长二年以上的川贝母鳞茎上的鳞片叶，用流水冲洗干净后进行消毒处理，然后接入MS+6-BA1.0～3.0mg·L^-1+IAA0.1～0.5mg·L^-1+KT0.5～1.5mg·L^-1培养基中，在培养温度为16～22℃、每天光照6～10h、光照强度为1000～1500lx的条件下诱导川贝母组培鳞茎。

3.根据权利要求2所述的一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，其特征在于：所述消毒处理是指在超净台上用浓度为0.1%～0.2%的升汞消毒4～8min，再用无菌水洗3～6次后用已灭菌的滤纸吸干材料表面的水分。

4.根据权利要求1所述的一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，其特征在于：多倍体不定根生长点区域细胞的培养步骤中所述生长点区域的长度为0.2～1.0mm。

5.根据权利要求1所述的一种川贝母多倍体脱毒苗的培养方法，其特征在于：炼苗和移栽步骤中炼苗的培养条件为温度8～18℃、相对湿度80%～90%、每天光照6～10h、光照强度400～800lx，移栽至松软土壤中的培养条件为温度12～22℃、相对湿度75%～80%、每天光照8～12h、光照强度为800～1000lx。