[发明专利]喜树碱在制备抗溶裂期EB病毒药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及喜树碱应用技术领域，具体涉及喜树碱在制备抗溶裂期EB病毒药物中的应用。 

背景技术

EB（Epstein-Barr）病毒是疱疹病毒科γ亚科成员中唯一能引起人类感染的淋巴滤泡病毒（lymphocrypovirus），是一种在人群中分布广泛的感染因子。EB病毒具有嗜B淋巴细胞的特征，能够在B淋巴细胞中建立隐形感染，刺激细胞的增生和转化，主要以多拷贝环状DNA形式游离于胞浆中，并整合至宿主染色体内，在一定的信号通路刺激下可导致B淋巴细胞转化成桨细胞，使EB病毒产生具有感染性的病毒颗粒，最终导致宿主细胞的溶解和死亡。近年来发现，在人类的腮腺管、口咽部及宫颈外口处上皮细胞表面均发现类似EB病毒受体的结构。EB病毒是传染性单核细胞增多症的病原体，EB病毒科引起单核细胞增多症，鼻咽癌，Burkitt’氏淋巴瘤，霍奇金病（Hodgkin’sdisease，HD），口腔腺体肿瘤，胸腺瘤，器官移植后B细胞淋巴瘤等。 

EB病毒在感染细胞中的生活周期可以分为潜伏期和溶裂期，其中溶裂期又分为立即早期、早期、病毒DNA复制期和晚期。在溶裂期感染时，环状的病毒基因组解环形成线状的DNA，病毒立即早期基因BZLF1最先表达生产出Zta蛋白，Zta可与DNA特异序列结合，其转录激活作用是通过与顺式作用元件中的Z反应元件（Zeta response element，ZRE）DNA结合蛋白基序结合而反式激活大量的EB病毒早期基因，从而引发EB病毒溶裂复制的连锁效应，使EB病毒进入溶裂期，综上所述，Zta蛋白在溶裂期感染基因组的转录和表达过程中起着重要作用。而Zta蛋白在与复制起始位点（OriLyt）DNA结合的过程中，受到拓扑异构酶I的调节。 

喜树碱是一种从喜树（Camptotheca acuminata）中分离出来的生物碱，它是 一种针对细胞核内拓扑异构酶I的一种很有前景的抗肿瘤药物（Bomgaars et al，2001）。喜树碱通过作用于拓扑异构酶I来抑制DNA复制、转录和有丝分裂。现有技术中，喜树碱类抗癌药物有许多优点，如抗肿瘤谱广、与其它抗肿瘤药物无交叉耐药性，对肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌以及皮肤癌等都有抑制肿瘤细胞的作用。但喜树碱在制备抗溶裂期EB病毒药物中的应用还未见报道。 

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供喜树碱在制备抗溶裂期EB病毒药物中的应用及喜树碱在制备预防EB病毒感染引起的癌症的药物中的应用。 

具体地，本发明的技术方案包括：喜树碱在制备抗溶裂期EB病毒药物中的应用。优选的实施例中，EB病毒在感染细胞中处于早期；或者EB病毒在感染细胞中处于立即早期。 

优选的实施例中，感染细胞5×10⁵-10×10⁵个/毫升时，喜树碱的使用量可以0.1-2.0纳摩尔，进一步优选为1.0-2.0纳摩尔；或者为0.1-0.9纳摩尔，进一步优选为0.3-0.9纳摩尔，更进一步优选为0.3纳摩尔。 

本发明的技术方案还包括：喜树碱在制备预防EB病毒感染引起的癌症的药物中的应用。优选的实施例中，所述EB病毒感染引起的癌症为鼻咽癌、Burkitt’氏淋巴瘤、霍奇金病、胃癌或胸腺瘤。 

本发明的技术要点是： 

步骤1、ZKO-293细胞的培养 

ZKO-293细胞于37℃，5%二氧化碳，PH7.2-7.4环境中，加入含有10%胎牛血清和100μg/ml潮霉素RPMI血清中培养； 

步骤2、立即早期EB病毒感染细胞和早期EB病毒感染细胞的构建 

Zta真核载体转染：将Hp-荧光素酶质粒与p3xFLAG-Zta共转入ZKO-293细胞中转化6h，并以Hp-荧光素酶质粒与p3xFLAG质粒共转入ZKO-293细胞作为对照，对荧光素酶进行检测判断真核载体是否转染成功； 

挑选上述Zta蛋白免疫印迹阳性、mDBP蛋白免疫印迹阳性、VCA蛋白免疫印迹阴性的ZKO-293细胞作为早期EB病毒感染细胞； 

挑选上述Zta蛋白免疫印迹阳性、mDBP蛋白免疫印迹阴性、VCA蛋白免疫印迹阴性的ZKO-293细胞作为立即早期EB病毒感染细胞； 

步骤3、加入喜树碱处理 

将上述早期EB病毒感染细胞或立即早期EB病毒感染细胞调整细胞密度为5×10⁵-10×10⁵个/毫升，加入不同浓度的喜树碱进行处理；