[发明专利]一种硫酸粘菌素的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物的分离纯化领域，尤其涉及一种硫酸粘菌素的纯化方法。

背景技术

硫酸粘菌素为白色或类白色粉末，味苦，有引湿性。难溶于甲醇或乙醇中，几乎不溶于醚和氯仿中。硫酸粘菌素是多粘菌素的硫酸盐，耐热，消化道不易吸收，排泄迅速，毒性小，无副作用，不易产生耐药菌株,是最安全的畜禽促生长抗生素之一。硫酸粘菌素是碱性多肽类抗生素，主要用于防治敏感菌的感染和促进畜禽生长，对革兰氏阴性菌 （尤其大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、嗜血杆菌和变形杆菌等）有强抑制作用，对革兰氏阳性菌（如金黄葡萄球菌和溶血性链球菌外）有抑制作用。

多粘菌素的分离目前以离子交换法应用最广(参见顾觉奋主编 分离纯化工艺原理.中国医药科技出版社，199，296-300)。离子交换法是利用多粘菌素为高价碱性化合物的性质，可用羧基阳离子交换树脂(Na型)进行提取。但是从纯化结果来看，离子交换法生产的硫酸粘菌素，其纯度不高， HPLC归一化法测总组分含量，一般只有 70-75%， 而欧洲药典 EP6.0 的标准为总组分含量不低于 79%。

 发明内容

本发明的目的是提供一种硫酸粘菌素的高效液相色谱系统纯化方法。

本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下：一种硫酸粘菌素的纯化方法，其特征在于以反相C18为固定相，用盐溶液、乙腈为流动相，用半制备型高效液相色谱分离纯化系统制备出硫酸粘菌素，包括以下步骤：

（1）将硫酸粘菌素粗品溶于流动相中，浓度为：10~200 mg/ml；

（2）用半制备型高效液相色谱分离纯化系统制备硫酸粘菌素；

（3）纳滤脱盐。

本发明具有以下技术效果：本发明采用半制备型高效液相色谱系统，制备出高纯度的硫酸粘菌素，工艺简单，产品质量稳定，可回收利用，无污染，实现清洁生产。

 

具体实施方式：

实施例1

样品用流动相溶解，浓度为100 mg/ml，采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行制备，色谱柱尺寸为Φ10×250 mm，反相C18填料，粒径为10 um，上样量40 mg，流动相A为30 mmol/L无水Na₂SO₄水溶液（pH 2.4），流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相中两种成分的比例，A/B=80/20。采用的紫外光度检测器的检测波长为215nm，收集硫酸粘菌素，40℃旋蒸浓缩后采用实验室级纳滤设备脱盐，经HPLC分析纯度≥98.7%。

实施例2

样品用流动相溶解，浓度为100 mg/ml，采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行制备，色谱柱尺寸为Φ10×250 mm，反相C18填料，粒径为10 um，上样量50 mg，流动相A为30 mmol/L无水Na₂SO₄水溶液（pH 2.4），流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相中两种成分的比例，A/B=80/20。采用的紫外光度检测器的检测波长为215nm，收集硫酸粘菌素，40℃旋蒸浓缩后采用实验室级纳滤设备脱盐，经HPLC分析纯度≥98.3%。

实施例3

样品用流动相溶解，浓度为100 mg/ml，采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统进行制备，色谱柱尺寸为Φ10×250 mm，反相C18填料，粒径为10 um，上样量80 mg，流动相A为30 mmol/L无水Na₂SO₄水溶液（pH 2.4），流动相B为乙腈，等度洗脱，流动相中两种成分的比例，A/B=82/18。采用的紫外光度检测器的检测波长为215nm，收集硫酸粘菌素，40℃旋蒸浓缩后采用实验室级纳滤设备脱盐，经HPLC分析纯度≥98.0%。