[发明专利]非常小的胚胎样(VSEL)干细胞及分离和利用其的方法

权利要求书

1.一种用于从非常小的胚胎样(VSEL)干细胞或其衍生物的群体形成胚状体样球体的方法，所述方法包括：

(a)提供包含VSEL干细胞或其衍生物的CD45^-细胞群；以及

(b)在包含诱导VSEL干细胞或其衍生物的胚状体样球体形成的一个或更多个因子的培养基中培养VSEL干细胞或其衍生物达足以使胚状体样球体形成的时间。

2.权利要求1所述的方法，其中所述VSEL干细胞或其衍生物包含CD34⁺／lin^-／CD45^-或Sca-1⁺／lin^-／CD45^-非常小的胚胎样(VSEL)干细胞。

3.权利要求1所述的方法，其中所述VSEL干细胞的直径约为3-4μm，表达SSEA-1、Oct-4、Rev-1、和Nanog的至少一种，具有由细胞质的窄缘围绕的大细胞核，并且具有开放型染色质(常染色质)。

4.权利要求1所述的方法，其中所述包含VSEL干细胞或其衍生物的CD45^-细胞群从人或从小鼠分离。

5.权利要求4所述的方法，其中所述包含VSEL干细胞或其衍生物的CD45^-细胞群从人或小鼠中选自由骨髓、外周血、脾、脐带血及其组合的组的来源分离。

6.权利要求1所述的方法，其中所述诱导VSEL干细胞或其衍生物的胚状体样球体形成的一个或更多个生长因子包括表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子-2及其组合。

7.权利要求1所述的方法，其中通过将所述VSEL干细胞或其衍生物与C2C12细胞共培养将所述一个或更多个因子提供给所述VSEL干细胞或其衍生物。

8.权利要求1所述的方法，进一步包括通过包含下列步骤的方法分离包含VSEL干细胞或其衍生物的CD45^-细胞群：

(a)提供怀疑包含CD45^-干细胞的初始细胞群；

(b)在足以允许每个抗体与，如果存在时，在初始细胞群的每个细胞上的它的靶标结合的条件下将所述初始细胞群与对于CD45特异的第一抗体和对于CD34或Sca-1特异的第二抗体接触；

(c)选择为CD34⁺或Sca-1⁺、并且还是CD45^-的细胞的第一亚群；

(d)在足以允许每个抗体与，如果存在时，在所述细胞群的每个细胞上的它的靶标结合的条件下将所述细胞的第一亚群与对于一个或更多个细胞表面标记物特异的一个或更多个抗体接触，所述标记物选自由CD45R／B220、Gr-1、TCRαβ、TCRγδ、CD11b及Ter-119组成的组；

(e)从所述细胞的第一亚群去除结合到步骤(d)的所述抗体的至少一个的那些细胞；以及

(f)收集为CD34⁺／lin^-／CD45^-或Sca-1⁺／lin^-／CD45^-的细胞的第二亚群，由此分离CD45^-干细胞的亚群。

9.权利要求8所述的方法，其中每个抗体包括可检测的标记。

10.权利要求9所述的方法，其中所述可检测的标记包括荧光标记或者可以通过包含荧光标记的试剂被检测的部分。

11.权利要求8所述的方法，其中所述分离包括FACS分类。

12.权利要求8所述的方法，进一步包括分离为c-met⁺、c-kit⁺、和／或LIF-R⁺的那些细胞。

13.权利要求8所述的方法，进一步包括分离表达选自由SSEA-1、Oct-4、Rex-1及Nanog组成的组的一个或更多个基因的那些细胞。

14.权利要求8所述的方法，其中所述细胞群包括骨髓样品、脐带血样品、或外周血样品。