[发明专利]一种诸葛菜人工种子制作方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和农业工程领域，具体涉及一种诸葛菜人工种子制作方法。

背景技术

诸葛菜又称二月兰，十字花科诸葛菜属植物，一年或二年生草本，广泛分布于全国大部分地区，对土壤光照等条件要求较低，极耐低温严寒、干旱，生命力顽强。花开为紫色或近白色异常耀眼，常被栽植作为绿化美化及地被植物，除作为养殖业常用饲料外，其嫩茎叶可作野菜食用，叶生长量较大，营养成分种类多、含有多种微量元素、维生素、胡萝卜素以及抗癌物质等,可开发成抗癌保健蔬菜。诸葛菜含油量高，也是一种很好的低芥酸、低亚麻酸和高亚油酸的油料植物，可开发出保健油。特别是具有降低人体内血清胆固醇和甘油三酯的功能的亚油酸比例高，为心血管病患者提供了良好的食用油。近年来，诸葛菜的喀斯特适生性得到高度关注，人们将诸葛菜作为喀斯特地区的生态修复的先锋物种。此外，诸葛菜还可以作为浮床植物以及植生混凝土植物、能源植物和蜜源植物等多种用途。

喀斯特地区土壤具有岩溶干旱、高钙、高pH以及低营养的特征，使得诸葛菜的萌发受到限制。由于喀斯特地区土壤的岩溶干旱特征，使得诸葛菜种子不能得到实时萌发。在喀斯特地区开发利用诸葛菜资源，必需要解决诸葛菜种子萌发问题。天然诸葛菜种子萌发需要较长时间，若这段时间水分得不到稳定地供给，则种子失去萌发能力，陈年种子萌发率极低，不到1%。相比天然种子，人工种子可以不受季节来进行播种萌发，可依据喀斯特地区气候条件雨季播种，一旦萌发后，即可正常生长发育直至成熟，从而避免喀斯特地区常出现的秋旱而导致诸葛菜天然种子不能萌发的结局。因此，为了更好地在喀斯特地区开发利用诸葛菜资源，开发诸葛菜的人工种子生产技术成为当务之急！

人工种子其实质是将组织培养产生的具有生物活性生长力的外植体即体细胞胚或胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等部分包裹在能提供养分的胶囊里，构成一种类似于种子的结构，具有天然种子发芽出苗的功能。相比天然种子，人工种子可以不受季节、环境各方面天然条件的限制来进行大规模大批量高效制作生产，使得农业生产的择时播种成为可能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诸葛菜人工种子制作方法，以不受季节、环境各方面天然条件的限制即可进行大规模大批量诸葛菜种子高效制作生产，实现喀斯特地区的诸葛菜的择时播种，为诸葛菜资源开发提供技术保证。

为了解决以上技术问题，本发明采用的具体技术方案如下：一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于包括以下步骤

步骤一，诸葛菜芽蔟的诱导：取诸葛菜幼苗，冲刷洗净，截取其上5～10mm的腋芽和顶芽，在超净台内完成消毒，无菌接种在芽蔟诱导培养基上进行芽蔟诱导培养；

步骤二，诸葛菜芽的增殖：将诸葛菜芽在所述芽蔟诱导培养基上培养至20天后，获得大量芽蔟，将所述大量芽蔟分割成单芽，转接到芽繁培养基上进行芽繁培养；

步骤三，诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备：待所述单芽在所述芽繁培养基上生长至20天后，在超净台里取3-5mm的芽，放在经过灭菌处理的包埋液中，搅拌充分混匀；用内径4-6mm的吸管吸取适量包有芽的包埋液，滴入到质量浓度为2.0%的CaCl₂溶液中，络合凝固10分钟，形成人工种子胶囊，取出所述人工种子胶囊并用滤纸吸干所述人工种子胶囊上的液体，将人工种子胶囊储藏待萌发。

所述的芽蔟诱导培养基的成分为：MS+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂；所述MS培养基为Murashige和Skooge培养基，所述NAA为α-萘乙酸，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤；所述芽蔟诱导培养基的pH=5.8；所述芽蔟诱导培养的条件为，以光强为35μmol·m^-2·s^-1的日光灯光源光照14小时。

所述的芽繁培养基的成分为：MS+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L+谷氨酸400mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂。所述芽繁培养条件为，以光强为35μmol·m^-2·s^-1的LED红光源光照14小时；所述芽繁培养基的pH=5.8。

所述的包埋液为海藻酸钠水溶胶，成分为：3.0%海藻酸钠+1/2MS+3.0%蔗糖+NAA0.5mg/L,所述包埋液的pH=5.8。

所述的MS培养基的成分包括：