[发明专利]一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法

权利要求书

1.一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：包括如下步骤，

（1）取草垛下的土壤样品，稀释后涂布平板培养基，温度为60±1.0℃条件下培养5-7天，挑选平板上出现水解透明圈的耐热菌株单菌落，将单菌落转接至斜面培养基，60±1.0℃条件下培养5-7天后接种含滤纸纤维的液体培养基，170r/min、60±1.0℃条件下振荡培养6-8天，测定滤纸酶解率，筛选出滤纸酶解率高的菌株；筛选得到的菌株经在平板培养基上活化培养后，接种至基本培养基中,60℃±1.0℃条件下，170r/min条件下振荡培养6-8天后测定纤维素酶产量，筛选出纤维素酶的嗜热菌株；

（2）将步骤（1）所得的嗜热菌株接种至基本培养基中，60℃±1.0℃条件下，170r/min条件下振荡培养24小时作为种子液，接种10%的种子液至发酵培养基中，170r/min、60±1.0℃摇床振荡培养4天,浓缩后得到酶制剂；

（3）将汽爆玉米秸秆置于温度为60±1.0℃的热水中，在该温度条件下保温1小时浸提；

（4）将步骤（2）所得的酶制剂添加至步骤(3)所得的玉米秸秆浸提液中，在60±1.0℃的条件下预酶解2小时；

（5）将步骤（4）得到的酶解液降温至35±1.0℃，之后接种7%的酿酒酵母，在35±1.0℃条件下同温同步酶解发酵得到燃料乙醇。

2.如权利要求1所述的一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：所述步骤（1）和步骤（2）中基本培养基的成分为：CMC-Na2%；蛋白胨0.5%；K2HP040.2%；MgSO4.7H2O0.05%，其余为水。

3.如权利要求1或2所述的一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的发酵培养基的成分为：CMC-Na2%，K₂HP0₄0.2%，MgSO₄.7H₂O0.05%，蛋白胨0.1%，CaCl₂0.002%，FeSO₄0.0004%，MnSO₄0.002%，其余为水；发酵培养基的pH为7.0。

4.如权利要求1所述的一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的酶制剂通过如下方法浓缩得到：

a)常温条件下，8000r/min离心发酵产物，收集上清液为粗酶液；

b)利用饱和硫酸铵沉淀法对粗酶液进行浓缩，并采用浓度为10毫摩尔/升，pH7.0的磷酸缓冲液透析12小时，得到浓缩的粗酶液；

c)粗酶液进行不同孔径的凝胶层析以获得内切葡聚糖酶、纤维二糖酶和葡萄糖苷酶蛋白，获得酶液；

d)利用离子交换层析对酶液进一步纯化，获得纯的酶制剂。

5.如权利要求1所述的一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：所述步骤（4）中酶制剂的添加量为30U/g纤维素。

6.如权利要求1所述的一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：所述步骤（4）中添加10%的表面活性剂。

7.如权利要求6所述的一种同步糖化发酵生产燃料乙醇的方法，其特征在于：所述表面活性剂由吐温80与聚乙二醇10000以2:3的体积比混合而成。