[发明专利]一种从胡黄连中提取分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药胡黄连的提取物及分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺，属于医药技术领域。 

背景技术

中药胡黄连为玄参科多年生草本植物胡黄连的干燥根茎，性寒味苦，有清热、除湿、明目、补肝、益胆、杀虫的效用，主治痨热咳嗽、湿热泻痢、小儿疳积、目赤等疾病。上世纪70年代以前，我国胡黄连一直依赖从印度进口。1963年以前，《中国药典》收载的胡黄连均为主产于印度的胡黄连Picrorhiza kurrooa Royle ex Benth。1965年在我国西藏东南部及云南西北部发现了同属植物，定名为西藏胡黄连Picrorhiza scrophulariaeflora Pennell。通过与印度胡黄连的比较，证明两者在生药形态、组织、水浸出物、醇浸出物、苦味度、化学成分等方面非常相似，可以代替印度胡黄连药用。 

据文献记载，胡黄连中含有环烯醚萜苷类、葫芦素类、酚苷类，另外还含有少量的芳香酸和D-甘露醇，其中胡黄连苷I（Picroside I）、胡黄连苷Ⅱ（Picroside Ⅱ）均属于环烯醚萜苷类化合物。胡黄连苷I和胡黄连苷Ⅱ均具有保肝降脂利胆作用和对神经细胞损伤的保护作用。 

由于胡黄连中成分复杂，提取中采用不同提取溶剂和提取方式所提取的提取物性质具有较大差异，提取物中胡黄连苷I和胡黄连苷Ⅱ以外的杂质的极性及水溶性等差异，对后续经大孔树脂或硅胶柱层析分离效果具有明显的影响。所以本发明采用大孔树脂结合硅胶柱层析的方式将减少提取过程产生的提取物性质差异变化对提取物的性质影响，使分离产物性质更稳定，提取分离纯化工艺系统性更强，重现性更好。 

                胡黄连苷I和胡黄连苷Ⅱ分子结构 

发明内容

本发明提供了具有开发药用的胡黄连苷I和胡黄连苷Ⅱ的制备方法。 

本发明的技术方案：从胡黄连中提取分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺，具体方法如下： 

（1）将胡黄连原料进行粉碎至粒径为50-200目； 

（2）制备胡黄连提取物：按照渗漉法用提取溶剂对胡黄连进行提取，提取溶剂为水、乙醇或者其混合溶液，提取后溶液60-65℃减压浓缩至60℃时测定相对密度为1.01g/cm³，浓缩液加适量水稀释后上已净化的大孔吸附树脂吸附，用水洗大孔吸附树脂柱，洗至近无色，并且molish反应阴性，用3-7倍柱体积30-75%乙醇洗脱，收集洗脱液，60-65℃减压浓缩、干燥、粉碎，得胡黄连提取物； 

（3）制备胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ粗品：将胡黄连提取物用95%乙醇--无水乙醇溶解，过滤，滤液拌入拌样用层析硅胶，干燥，加载于分离用层析硅胶柱床顶端，用乙酸乙酯、无水乙醇的混合溶剂洗脱，收集流出液，将胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ纯度大于50%流份分别合并，回收溶剂，干燥，粉碎得胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ粗品； 

（4）制备高纯度胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ：分别将胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ粗品用水溶解为0.25-0.5g·mL^-1的溶液，过0.45μm的微孔滤膜，湿法上样于反相柱层析系统，反相柱层析系统的填料为硅胶基质或聚苯乙烯/二乙烯基苯基质，即PS/DVB基质，用体积比为1︰100-1︰0的甲醇-水或者乙腈-水混合溶剂洗脱，分段收集流出液，将胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ纯度大于90%流份分别合并，回收溶剂，干燥，粉碎得纯度高于90%的胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ。 

上述从胡黄连中提取分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺，所述的胡黄连为玄参科植物胡黄连Picrorrhiza Kurrooa Royleex Benth或西藏胡黄连Picrorrhiza scrophulariaeflora Pennell的根茎。 

上述从中胡黄连提取分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺，所述的步骤（2）中所用大孔树脂为非极性或弱极性树脂，其中非极性为苯乙烯型树脂，弱极性树脂为聚苯乙烯-丙烯酸酯型。 

上述从胡黄连中提取分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺，所用的苯乙烯型树脂为HPD100型大孔树脂，聚苯乙烯-丙烯酸酯型树脂为ME-2型大孔树脂。 

上述从胡黄连中提取分离纯化胡黄连苷Ⅰ和胡黄连苷Ⅱ的制备工艺，所述的步骤（3） 所用拌样用层析硅胶的用量为胡黄连提取物1-1.5倍重量，分离用层析硅胶加入量为胡黄连提取物重量的3～10倍重量。