[发明专利]从魁蚶中分离制备一种抗肿瘤多肽化合物的方法和用途

权利要求书

1.一种魁蚶(Arca inflata Reeve)中抗肿瘤活性多肽化合物，其分子量为20538.0 Da, 等电点为5.4，含α-螺旋45.2%、β-折叠2.9%、β-转角26.0%、无规卷曲25.9%，其氨基酸片段序列包含I/LSMEDVEESR、KNGMHSI/LDVNHSGR、AMKI/LI/LNPKKGI/LVPI/LR和AMGAHKPPKGNEI/LGHR。

2.权利要求1的魁蚶中的抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征是：将新鲜魁蚶剥壳、取出内容物清洗，加入缓冲液匀浆提取，离心，取上清液，硫酸铵分级沉淀，取沉淀透析脱盐，采用离子交换柱层析分离，分别收集活性峰，透析脱盐后经疏水层析柱分离，得到纯度可达99%的活性多肽化合物。

3.根据权利要求2述的魁蚶中抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征在于加入的缓冲液为0.03 mol/L, pH为8.0的磷酸钠缓冲液，加入缓冲液的体积与魁蚶的重量比为1:3，用高速组织捣碎机进行匀浆。

4.根据权利要求2所述的魁蚶中抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征在于采用硫酸铵分级沉淀，先使提取上清液达到70%饱和度硫酸铵，离心，取上清夜，再加入硫酸铵盐析达到100%饱和度，离心，留沉淀。

5.根据权利要求2所述的魁蚶中抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征在于将沉淀用少量0.03mol/L, pH为8.0的Tris缓冲液溶解后，用透析袋透析脱盐后，用DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换层析柱分离，其洗脱初始缓冲液为pH8.0 Tris-HCl缓冲液，0～2.0 mol/L NaCl进行阶段洗脱，280 nm处检测吸收峰。

6.根据权利要求2所述的魁蚶中抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征在于收集用0.1 mol/L氯化钠洗脱的洗脱液，透析脱盐后，用Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析柱分离，其洗脱液为0.03 mol/L，pH8.0磷酸钠缓冲液，浓度1.0～0 mol/L的硫酸铵进行阶段洗脱，280 nm处检测吸收峰。

7.根据权利要求2所述的魁蚶中抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征在于收集用不含硫酸铵的磷酸钠缓冲液洗脱的洗脱液，透析脱盐后，浓缩冷冻干燥，得到了魁蚶中的活性多肽化合物。

8.根据权利要求2所述的魁蚶中抗肿瘤活性多肽化合物的分离制备方法，其特征在于得到的魁蚶多肽化合物的分子量为20538.0 Da，等电点为5.4，含α-螺旋45.2%、β-折叠2.9%、β-转角26.0%、无规卷曲25.9%。

9.权利要求1或2所述的魁蚶中抗肿瘤多肽化合物可用于制备抗肿瘤药物。